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在色譜法中存在兩相，一相是固定不動(dòng)的，即固定相；另一相則不斷流過固定相，即流動(dòng)相。色譜法的分離就是溶于流動(dòng)相中的各組分經(jīng)過固定相時(shí)，由于與固定相發(fā)生作用的大小、強(qiáng)弱不同，在固定相中滯留時(shí)間不同，從而先后從固定相中流出的分離過程來進(jìn)行分離。
更詳細(xì)地說就是使用外力使含有樣品的流動(dòng)相通過與流動(dòng)相互不相溶的固定相表面。當(dāng)流動(dòng)相中攜帶的混合物流經(jīng)固定相時(shí)，混合物中的各組分與固定相發(fā)生相互作用（吸附、分配、離子吸引、排阻、親和）。由于混合物中各組分在性質(zhì)和結(jié)構(gòu)上的差異，與固定相之間產(chǎn)生的作用力的大小、強(qiáng)弱不同，隨著流動(dòng)相的移動(dòng)，混合物在兩相間經(jīng)過反復(fù)多次的分配平衡，使得各組分被固定相保留的時(shí)間不同，從而按一定次序由固定相中先后流出，從而實(shí)現(xiàn)混合物中各組分的分離與檢測。
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