elisa試劑盒供應廠商實驗過程中，難免會遇到各種不同的問題，比如標準曲線不好，試劑盒的回收率，假陰性，假陽性，實驗的重復性不好等等。使用96孔板的elisa試劑盒測定中，常發現有“邊緣效應"，即外周孔顯色較中心孔深。經研究證實在溫育中的熱力學梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身為不良熱導體，在實驗室的常規elisa試劑盒測定中，將板從室溫(通常在25℃左右)置于37℃溫箱，板也升溫時，在外周孔與中心孔之間可能存在一熱力學梯度。因此使用水浴或在將反應溶液加入至板孔中時，將板和溶液均加熱至溫育溫度(如37℃)，就可以很容易地排除“邊緣效應"，并且可提高測定的重復性。 

    elisa試劑盒未回溫，試劑盒回溫到25℃，溫度控制不好，控制正確溫度，孵育時間不準確，控制孵育時間，洗滌時沖擊力太大、浸泡時間過長、洗滌次數增 加，洗滌4-5次，每孔250ul，然后拍干。elisa試劑盒陽光直射，對著風直接吹，避風。酶標儀的波長錯誤，酶標儀的波長450nm，抗體的稀釋錯誤，正確的稀釋抗體，水質問題，用娃哈哈礦泉水代替。

    elisa試劑盒添加量不準確，添加濃度不適合，ELISA試劑盒添加合適的濃度。elisa試劑盒取液吹干量多，準確的取液吹干，取到其它相層液體，取需用相吹干，溶液未稀釋或加入量少，正確的稀釋復溶液。elisa試劑盒添加量不準確，的添加量，添加濃度不適合，添加合適的濃度，取液吹干量少，準確的取液吹干溶液稀釋錯誤或加入量多，正確的稀釋復溶液。在現在的elisa試劑盒供應廠商中，必然有使用微量加樣器加入樣本的步驟。注意的關鍵點是：加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產生氣泡。加樣太快，無法保證微量加樣的準確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區，易導致非特異吸附。elisa試劑盒供應廠商濺出會對鄰近孔產生污染。elisa試劑盒供應廠商出現氣泡則反應液界面有差異。所以，有時候一份標本用相同的試劑盒這次測定為陽性，下次測定為陰性，往往就是上述加樣及試劑的錯誤所致。