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培養(yǎng)細(xì)胞株傳代根據(jù)不同細(xì)胞采取不同的方法。貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞如COS-7、CHO等用消化法傳代；部分貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞如PC12用直接吹打即可傳代。
一、用品
(1) 0.25％胰蛋白酶，全培養(yǎng)液
(2) 滴管，離心管，培養(yǎng)瓶(皿)，培養(yǎng)瓶蓋，注射器，計(jì)數(shù)6
二、步驟
(1) 貼壁細(xì)胞的消化法傳代：
① 吸除瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液。
② 以50ml培養(yǎng)瓶為例，向瓶?jī)?nèi)加入2-3ml胰蛋白酶，輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)瓶，使消化液流遍所有細(xì)胞表面。
③ 消化在37C或室溫25C以上環(huán)境下進(jìn)行。消化后把培養(yǎng)瓶放置顯微鏡下進(jìn)行觀察．發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)回縮、細(xì)胞間隙增大后。應(yīng)立即終止消比，然后吸掉消化液后再加全培養(yǎng)液終止消化。
④ 用彎頭吸管，吸取瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)液，反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞，吹打過(guò)程要順序進(jìn)行，從培養(yǎng)瓶底的一端開(kāi)始到另一端結(jié)束，以保證所有的底部都被吹到。吹打動(dòng)作要輕柔同時(shí)盡可能不要出現(xiàn)泡沫。這些都對(duì)細(xì)胞有損傷。細(xì)胞脫離瓶壁后形成細(xì)胞懸液。
⑤ 計(jì)數(shù)，分別接種在新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。
部分貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞，不經(jīng)消化處理直接吹打也可使細(xì)胞從瓶壁脫落下來(lái)，而進(jìn)行傳代。但這種方法于部分貼壁不牢的細(xì)胞，如Hela、PC12細(xì)胞等。直接吹打?qū)?xì)胞損傷較大，細(xì)胞常也有較大數(shù)目的丟失，因而絕大部分貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞均需消化后，才能吹打傳代。
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