大鼠I型膠原（COL-I）酶聯(lián)免疫分析
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍：96T1μg/L-32μg/L
使用目的：
本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中 I型膠原（COL-I）含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠  I 型膠原（COL-I）水平。用純化的大鼠 I型膠（COL-I）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入 I型膠原（COL-I），再與 HRP 標記的 I 型膠原（COL-I）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在   HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣中的 I型膠原（COL-I）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠   I型膠原（COL-I）濃度。
試劑盒組成
30倍濃縮洗滌液
20ml×1瓶
6ml×1瓶
12孔×8條
6ml×1瓶
6ml×1瓶
6ml×1/瓶
終止液
6ml×1瓶
0.5ml×1瓶
1.5ml×1瓶
1份
2   酶標試劑
標準品（64μg/L）
標準品稀釋液
3   酶標包被板
4   樣品稀釋液
5   顯色劑 A液
6   顯色劑 B液
10   說明書
11   封板膜
12   密封袋
2張
1個
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因   NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1.  標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
32μg/L
16μg/L
8μg/L
4μg/L
2μg/L
5號標準品
4號標準品
3號標準品
2號標準品
1號標準品
150μl的原倍標準品加入  150μl標準品稀釋液
150μl的  5號標準品加入  150μl標準品稀釋液
150μl的  4號標準品加入  150μl標準品稀釋液
150μl的  3號標準品加入  150μl標準品稀釋液
150μl的  2號標準品加入  150μl標準品稀釋液
2.  加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl（樣品zui終稀釋度為 5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.  溫育：用封板膜封板后置  37℃溫育30分鐘。
4.  配液：將  30倍濃縮洗滌液用蒸餾水  30倍稀釋后備用
5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置  30秒后棄去，如此
重復(fù) 5次，拍干。
6.  加酶：每孔加入酶標試劑  50μl，空白孔除外。
7.  溫育：操作同  3。
8.  洗滌：操作同  5。
9.  顯色：每孔先加入顯色劑  A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液  50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。  測定應(yīng)在加終止液后 15分鐘以內(nèi)進行。
操作程序總結(jié)：
計算以標準物的濃度為橫坐標， OD  值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的
OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與  OD值計算出標
準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，