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基因組文庫(kù)(Genomic Library)構(gòu)建服務(wù)

來(lái)源:上海乾思生物科技有限公司   2015年08月01日 15:19  

關(guān)鍵詞:基因組文庫(kù)(Genomic Library)構(gòu)建服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
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基因組文庫(kù)(Genomic Library)構(gòu)建服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧,承諾客戶不成功不收費(fèi)。我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信,我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒,客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報(bào)告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
產(chǎn)品品牌:基因組文庫(kù)(Genomic Library)構(gòu)建服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)   http://www.。。com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程:
基因組DNA文庫(kù)包括了基因組所有順序的隨機(jī)克隆片段。一個(gè)好的基因組DNA文庫(kù)的大小應(yīng)足夠大,以便包括所有的基因DNA順序。DNA克隆片段也應(yīng)足夠大,其中包括整個(gè)基因、連接基因及它們穩(wěn)定形式所要的側(cè)翼順序。為了獲得高的克隆效率和較大的插入片段,λ噬菌體載體和質(zhì)粒經(jīng)常被使用構(gòu)建基因組DNA文庫(kù)。λ噬菌體文庫(kù)易于操作,噬菌體載體上有多克隆位點(diǎn)。λ噬菌體能容納10-50kb插入DNA,載體類型應(yīng)根據(jù)所要基因組DNA的大小和用途來(lái)選擇。
構(gòu)建一個(gè)基因組DNA文庫(kù)的基本步驟:
①分離純化基因組DNA;
②切割DNA成合適大小的片段以用于克隆;
③載體DNA的制備;
④把基因組DNA段和載DNA連接;
⑤包裝重組分子;
⑥測(cè)定入噬菌體滴度;
⑦擴(kuò)增DNA文庫(kù);
⑧評(píng)估文的質(zhì)量。
基因組文庫(kù)構(gòu)建步驟:1、載體: 
l噬菌體:48.5kb,插入型(zui多可容納9kb)、取代型(可容納 38-51kb,zui適19-20kb), EMBL, Charon 粘性質(zhì)粒(Cosmid):4-6kb, 質(zhì)粒+噬菌體的性質(zhì),可容納大片段的外源基因,zui多可容納46kb。 酵母人工染色體克隆體系(YAC,Yeast Artificial Chromosome  Cloning System) 插入大小200—1000kb 2、 載體DNA的制備: 高分子量的外源DNA 100-150kb載體DNA酶切反應(yīng)-----載體臂的純化-----載體脫磷處理 www.cqwestern。。com(常用BamHI)   (蔗糖密度梯度離心)  (堿性磷酸酶) 3、連接和包裝:外源片段與兩臂之間的比例,包裝蛋白 4、感染宿主菌:選擇合適的宿主菌,LE392, NM538, NM539, KW251等 5、基因組文庫(kù)的保存和擴(kuò)增: 6、測(cè)滴度,要在106fu以上
7、保存:氯仿4℃,7% DMSO -70℃
產(chǎn)生DNA段的方法要求切點(diǎn)隨機(jī)性高,使任一基因都可能被完整地克隆,并且在兩側(cè)都留有粘性末端以利于 DNA段間的連接。機(jī)械剪切方法的優(yōu)點(diǎn)是隨機(jī)性高,可是所得片段兩端沒(méi)有粘性末端,有時(shí)較為不便與載體連接。用限制性核酸內(nèi)切酶酶解的隨機(jī)性較差,但是兩端有粘性末端,便于和載體相連接(見(jiàn)重組DNA技術(shù))。

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