免疫組化,是應用免疫學基本原理——抗原抗體反應,即抗原與抗體特異性結合的原理,通過化學反應使標記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來確定組織細胞內抗原(多肽和蛋白質),對其進行定位、定性及定量的研究,稱為免疫組織化學技術(immunohistochemistry)或免疫細胞化學技術(immunocytochemistry)。既然是抗體與抗原的反應,抗體就在實驗中顯得特別重要,如何選擇抗體就顯得很重要,今天上海恒遠與您一起分享一下如何選擇正確的二抗,進行免疫組化實驗。
1 種屬來源要匹配:根據所用一抗選定二抗。一般來說,如果一抗是小鼠源性,二抗應選擇兔/山羊或其它種屬抗小鼠的抗體。目前,美國Vector公司和 Zymed公司都有開發的用小鼠抗體檢測小鼠組織的試劑盒,即一抗來源于小鼠,該試劑盒采用了通用非特異性封閉液和封閉內源性小鼠Ig的封閉液,可以 得到清晰的染色背景。
2.注意抗體同種型和亞型:確定一抗同種型和亞型后,可以選擇抗一抗來源種屬廣譜Ig或針對一抗亞型的二抗。如一抗是小鼠IgG1,可以選用山羊抗小鼠的Ig或IgG1的二抗。
3.正確使用:也需要重新選擇稀釋比例。一般上海恒遠會提供稀釋比例從1:10稀釋度始,作5倍比稀釋。
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