關鍵詞:RNAi質粒載體構建技術服務|實驗技術服務
簡介：世界*品牌RNAi質粒載體構建技術服務|實驗技術服務原裝，質量保證,*。
RNAi質粒載體構建技術服務|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經驗及實驗操作技巧，承諾客戶不成功不收費。在獲得重組蛋白產品的同時，我們也會提供相應的原始數據和原始圖片,不需要再額外花費精力重復實驗。另一方面，我們所有的實驗數據真實可信，我們提供原始的表達菌株和克隆質粒，客戶可以依據我們的實驗報告重復我們的實驗結果。
產品品牌：   http://www.。。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序實驗流程：
近年來的研究表明,一些短片斷的雙鏈RNA可以通過促使特定基因的mRNA降解來、特異的阻斷體內特定基因表達,誘使細胞表現出特定基因缺失的表型, 稱為RNA干擾（RNA interference,RNAi）.siRNA（small interfering RNAs）就是這種短片斷雙鏈RNA分子,能夠以序列同源互補的mRNA為靶目標,降解特定的mRNA.RNAi的發現具有劃時代的意義,它不僅深入揭示 了細胞內基因沉默的機制,而且它還是后基因組時代基因功能分析的有力工具,極大地促進了人類揭示生命奧秘的進程.現在越來越多的研究人員開始采用RNAi 來研究生物體的基因表達.RNAi技術可廣泛應用到包括功能基因組學,藥物靶點篩選,細胞信號傳導通路分析,疾病治療等等.
目前為止較為常用的5種制備siRNAs的方法包括：
·化學合成
·體外轉錄
·長片斷dsRNAs經RNase III 類降解 (e.g. Dicer, E. coli, RNase III)
·siRNA表達載體或者病毒載體在細胞中表達siRNAs
·PCR制備的siRNA表達框在細胞中表達
獲得高純度的siRNA產物是進行實驗的*步,而轉染的效率則是非常關鍵的因素.
RNAi表達載體的構建
1. 目的基因的確定
2、設計siRNA靶序列
基本步驟：
（1）將100μl感受態細胞于冰上解凍.
（2）取5μl連接產物加入到感受態細胞中,輕輕旋轉幾次以 混勻內容物. 在冰上放置30分鐘.
（3）將管放入預加溫到42℃的水浴中,熱激90秒.快速將管轉移到冰浴中,使細胞冷卻1~2分鐘.
（4）每管中加700μl LB培養基,37℃振蕩培養1小時,進行復蘇.
（5）室溫4,000rpm離心5分鐘,棄去上清后,用剩余100μl培養基重懸細胞并涂布到含抗性的LB瓊脂平板表面.注意：細胞用量應根據連接效率和感受態細胞的效率進行調整.
（6）將平板置于室溫直至液體被吸收.
（7）倒置平皿,于37℃培養,12~16小時后可出現菌落.
RNAi：（RNA interference）RNA干擾
內源性或外源性雙鏈RNA(dsRNA)介導的能誘導細胞內與其序列同源的特異基因表達沉默或抑制的效應,誘使細胞表現出特定基因缺失的表型,稱為RNA干擾,它也是體內抵御外在感染的一種重要保護機制.
siRNA ：(small interfering RNAs)小干擾RNA
由長dsRNA裂解而成的一種19-25nt的短片斷雙鏈RNA分子,能夠以同源互補序列的RNA為靶目標降解特定的mRNA, RNAi的關鍵效應分子.
shRNAs:(small hairpin RNA )小發夾RNA
是設計為能夠形成發夾結構的非編碼小RNA分子,shRNA需通過載體導入細胞后,然后利用細胞內的酶切機制得到siRNA而zui終發揮RNA干擾作用.
Dicer：屬于RNaseⅢ 家族,是dsRNA的特異性核酸內切酶
RISC：(RNA-inducing silencing complex) RNA誘導的沉默復合體,具有核酸內切、外切以及解旋酶活性.