細(xì)胞計數(shù)

原理：當(dāng)待測細(xì)胞懸液中細(xì)胞均勻分布時，通過測定一定體積懸液中的細(xì)胞的數(shù)目即可換算出每mL細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量。

操作步驟：

1. 將計數(shù)板及蓋玻片擦拭干凈，并將蓋玻片蓋在計數(shù)板上。

2. 輕輕吹打細(xì)胞懸液，使細(xì)胞均勻分布。吸出少許細(xì)胞懸液滴在細(xì)胞入口，使細(xì)胞懸液充滿蓋玻片和計數(shù)板之間，靜置1~2min，使細(xì)胞沉降。注意蓋玻片下不要有氣泡，也避免細(xì)胞懸液進(jìn)入旁邊的槽中。

3. 在顯微鏡下對A/B/C/D四個大格內(nèi)的細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)，壓在大格四周邊線上的細(xì)胞只計數(shù)壓在2條邊線上的細(xì)胞（如右側(cè)和下方）。若鏡下有2個細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán)，則應(yīng)按單個細(xì)胞計算；若細(xì)胞團(tuán)數(shù)量較多，占細(xì)胞總量的10%左右，則說明細(xì)胞分散不好會導(dǎo)致計算不準(zhǔn)確，需要重新制備細(xì)胞懸液。

4. 按公式計數(shù)細(xì)胞數(shù)量   細(xì)胞數(shù)/mL=四個大格內(nèi)細(xì)胞總數(shù)×104/4

(每一個大格的體積為長1mm×寬1mm×高0.1mm=0.1mm3，1mL=1000 mm3，因此計算時需×104)

細(xì)胞活力檢測

    在細(xì)胞群體中總有一些因各種原因而死亡的細(xì)胞，總細(xì)胞中活細(xì)胞所占的百分比叫做細(xì)胞活力。由組織中分離細(xì)胞一般要檢查活力，以了解分離的過程對細(xì)胞是否有損傷作用；復(fù)蘇后的細(xì)胞也要檢查活力，了解凍存和復(fù)蘇的效果。細(xì)胞懸液制備后，zui常用活體染料臺盼藍(lán)對細(xì)胞染色，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。

    正常細(xì)胞胞膜完整，臺盼藍(lán)不能透過活細(xì)胞正常完整的細(xì)胞膜，故活細(xì)胞不著色；而喪失活性或細(xì)胞膜不完整的細(xì)胞胞膜通透性增加，臺盼藍(lán)能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)而使細(xì)胞著色（藍(lán)色）。

操作步驟：

1. 配制4%臺盼藍(lán)母液：稱取4g臺盼藍(lán)，加少量蒸餾水研磨，加雙蒸水至100mL，用濾紙過濾，4℃保存。使用時用PBS稀釋至0.4%。

2. 胰酶消化貼壁細(xì)胞，制備單細(xì)胞懸液，并作適當(dāng)稀釋（106 cells/mL）。

3. 取少量細(xì)胞懸液與0.4%臺盼藍(lán)溶液以9:1混合，輕輕吹打混勻，染色2~3min。

4. 顯微鏡下觀察，死細(xì)胞著淺藍(lán)色并膨大，無光澤；活細(xì)胞保持正常形態(tài)，無色透明有光澤。若需計算活細(xì)胞率則將染色的細(xì)胞懸液滴入細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)。

活細(xì)胞率（%）= 活細(xì)胞總數(shù)/（活細(xì)胞總數(shù)+死細(xì)胞總數(shù)）×100%

注意事項：臺盼藍(lán)染細(xì)胞時，時間不宜過長。否則，部分活細(xì)胞也會著色，會干擾計數(shù)的準(zhǔn)確性。