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DNA合成服務|實驗技術服務

來源:上海乾思生物科技有限公司   2015年05月20日 16:39  

關鍵詞:DNA合成服務|實驗技術服務
簡介:世界*品牌DNA合成服務|實驗技術服務原裝,質量保證,*。
DNA合成服務|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經驗及實驗操作技巧,承諾客戶不成功不收費。在獲得重組蛋白產品的同時,我們也會提供相應的原始數據和原始圖片,不需要再額外花費精力重復實驗。另一方面,我們所有的實驗數據真實可信,我們提供原始的表達菌株和克隆質粒,客戶可以依據我們的實驗報告重復我們的實驗結果。
產品品牌:   http://www.。。com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序實驗流程:
DNA復制的一般過程:
脫氧核糖核酸(DNA)是生物界遺傳的主要物質基礎。生物有機體的遺傳特征以密碼(code)的形式編碼在DNA分子上,表現為特定的核苷酸排列順序-即遺傳信息,在細胞分裂前通過DNA的復制(Replication),將遺傳信息由親代傳遞給子代,在后代的個體發育過程中,遺傳信息自DNA轉錄(Transcription)給RNA,并指導蛋白質合成,以執行各種生命功能,使后代表現出與親代相似的遺傳性狀,這種遺傳信息的傳遞方向,是從DNA到RNA再到蛋白質,即所謂的生物學“中心法則”,80年代以后在某些致癌RNA病毒中發現遺傳信息也可存在于RNA分子中,由RNA通過逆轉錄(reverse transcription)的方式將遺傳信息傳遞給DNA。
DNA復制起始的關健步驟是前導鏈DNA的合成,一旦前導鏈DNA的聚合作用開始,隨從鏈DNA的合成也隨著開始。由于前導鏈的合成是連續進行的,所以它的起始相對簡單,而隨從鏈的合成是不連續進行的,所以引發階段比較復雜。大腸桿菌的引發前體由Dna B. Dna C和單鏈結合蛋白組成。
(1)引物酶(primase)
它是一種特殊的RNA聚合酶,可催化短片段RNA的合成。這種短RNA片段一般十幾個至數十個核苷酸不等,它們在DNA復制起始處做為引物。RNA引物的3′桹H末端提供了由DNA聚合酶催化形成DNA分子*個磷酸二酯鍵的位置。
(2)引發體(primosome)
高度解鏈的模板DNA與多種蛋白質因子形成的引發前體促進引物酶結合上來,共同形成引發體,引發體主要在DNA隨從鏈上開始,它連續地與引物酶結合并解離,從而在不同部位引導引物酶催化合成RNA引物,在引物RNA的3′桹H末端接下去合成DNA片段,這就是隨從鏈不連續合成的開始。
1.DNA聚合酶Ⅰ:
DNA polⅠ是由一條多肽鏈組成,分子量為109KD。酶分子中含有一個Zn++,是聚合活性必須的。
大腸桿菌每個細胞中約有400個酶分子,每個酶分子每分鐘在37℃下能催化667個核苷酸參入到DNA鏈中,用枯草桿菌蛋白酶可將此酶水介成兩個片段,大片段分子量為76KD,通常稱為klenow片段,小片段為34KD。大小片段具有不同的酶活性。
(1)DNA聚合酶的5′→3′聚合活性:
這是DNA聚合酶zui主要的活性,按模板DNA上的核苷酸順序,將互補的dNTP逐個加到引物RNA3′桹H末端,并促進3′桹H與dNTP的5′桺O4形成磷酸二酯鍵,酶的專一性表現為新進入的dNTP必須與模板DNA堿基配對時才有催化作用,5′→3′聚合活性存在于klenow片段上。
DNA聚合酶催化的DNA鏈延長
(2)DNA聚合酶的3′→5′外切核酸酶活性:
這種酶活性的主要功能是從3′→5′方向識別并切除DNA生長鏈末端與模板DNA不配對而游離的核苷酸,這種功能稱為校對功能,這是保證其聚合作用的正確性*的,因此對于DNA復制中*的保真性是至關重要的。
(3)DNA聚合酶的5′→3′外切核酸酶活性:
這種酶活性是從DNA鏈的5′端向3′末端水解已配對的核苷酸,本質是切斷磷酸二酯鍵,每次能切除10個核苷酸。因此,這種酶活性在DNA損傷的修復中可能起重要作用,對完成的DNA片段去除5′端的RNA引物也是必須的。
DNA polⅠ的5′→3′聚合活性和5′→3′外切酶活性協同作用,可以使DNA一條鏈上的切口從5′→3′方向移動,這種反應叫做缺刻平移(nick translation),利用此反應可在體外對DNA片段進行放射性磷(α-32PdNTP)的標記制成探針(probe),進行核酸的分子雜交實驗,是現代分子生物學的一項重要技術。

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