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CCK-8細胞增殖檢測服務|實驗技術服務

來源:上海乾思生物科技有限公司   2015年05月20日 16:36  

關鍵詞:CCK-8細胞增殖檢測服務|實驗技術服務
簡介:世界*品牌CCK-8細胞增殖檢測服務|實驗技術服務原裝,質量保證,*。
CCK-8細胞增殖檢測|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經驗及實驗操作技巧,承諾客戶不成功不收費。在獲得重組蛋白產品的同時,我們也會提供相應的原始數據和原始圖片,不需要再額外花費精力重復實驗。另一方面,我們所有的實驗數據真實可信,我們提供原始的表達菌株和克隆質粒,客戶可以依據我們的實驗報告重復我們的實驗結果。
產品品牌:CCK-8細胞增殖檢測服務|實驗技術服務   http://www.。。com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序實驗流程:
Cell Counting Kit簡稱CCK8試劑盒,是一種基于WST-8(化學名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。
    WST-8屬于MTT的升級產品,工作原理為:在電子耦合試劑存在的情況下,可以被線粒體內的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產物(formazan)。顏色的深淺與細胞的增殖成正比,與細胞毒性成反比。使用酶標儀在450mM波長處測定OD值,間接反映活細胞數量。
    CCK8法應用非常廣泛,如藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗以及生物因子的活性檢測等。
    酚紅和血清對CCK8法的檢測不會造成干擾;
    細胞毒性非常低,因此加入WST-8顯色后,可以在不同時間反復用酶標儀讀數從而找到*測定時間。關于不同細胞增殖和細胞毒性檢測試劑盒的比較和選擇關于不同細胞增殖和細胞毒性檢測試劑盒的比較和選擇,請參考CCK8法的操作步驟
實驗一:細胞活性檢測
1、在96孔板中接種細胞懸液(100μL/孔)。將培養板放在培養箱中預培養(37℃,5% CO2)。
2、向每孔加入10 μL CCK8溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響OD值的讀數)。
3、將培養板在培養箱內孵育1-4小時。
4、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。
5、若暫時不測定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。24小時內測定,吸光度不會發生變化。
實驗二:細胞增殖-毒性檢測
1、在96孔板中配置100μL的細胞懸液。將培養板在培養箱預培養24小時(37℃,5% CO2)。
2、向培養板加入10μL不同濃度的待測物質。
3、將培養板在培養箱孵育一段適當的時間(例如:6、12、24或48小時)。
4、向每孔加入10μL CCK8溶液(注意不要再孔中生成氣泡,它們會影響OD值的讀數)。
5、將培養板在培養箱內孵育1-4小時。
6、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。
7、若暫時不測定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。24小時內測定,吸光度不會發生變化。
    注意:如果待測物質有氧化性或還原性的話,可在加CCK8之前更換新鮮培養基(除去培養基,并用培養基洗滌細胞兩次,然后加入新的培養基),去掉藥物影響。當然藥物影響比較小的情況下,可以不更換培養基,直接扣除培養基中加入藥物后的空白吸收即可。
    活力計算:
細胞活力*(%)=[A(加藥)-A(空白)]/[A(0加藥)-A(空白)] ×100
A(加藥):具有細胞、CCK8溶液和藥物溶液的孔的吸光度
A(空白):具有培養基和CCK8溶液而沒有細胞的孔的吸光度
A(0加藥):具有細胞、CCK8溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度
*細胞活力:細胞增殖活力或細胞毒性活力
    保存條件:
4℃避光保存一年有效,-20℃避光保存兩年有效。

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