動物源性食品中喹諾酮類物質檢測的固相萃取方法       

——逗點生物

一、實驗目的

本研究利用固相萃取法作為豬肉樣品的前處理方法，LC-MS/MS法作為檢測手段。該方法可簡化豬肉樣品的前處 理過程，節省有機溶劑的使用，操作簡便。

二、實驗目標物

三 種 喹 諾 酮 類 藥 物 ： 依 諾 沙 星 （ CAS:74011-58-8； 84294-96-2） ， 洛 美 沙 星 （ CAS:98079-51-7） ， 麻 保 沙 星

（CAS:115550-35-1）。

三、應用范圍

本方法適用于動物源食品中喹諾酮類藥物LC-MS/MS檢測及確證。

四、參考標準

進出口行業標準《SN/T 1751.2-2007 動物源性食品中喹諾酮類藥物殘留檢測方法； 第2部分：液相色譜-質譜/質 譜法》。

五、實驗材料

Biocomma?  PolybaseTM HLB固相萃取柱3mL/60mg。

六、實驗方法

1、樣品提取

稱取均質試樣5.0ｇ試樣（至0.01ｇ）于50mL離心管中，加入20ｍＬ乙腈，渦旋混合1min，超聲提取10min，

10000r/min離心，提取三次，合并上清液。

2、SPE柱凈化

(1) 活化：加入6 mL甲醇，6 mL水活化。

(2) 上樣和洗脫：當溶劑液面到達柱吸附層表面時，立即倒入上述待凈化溶液，以2mL/min-3mL/min的速度過 柱，棄去濾液，用2 mL 5%甲醇水溶液淋洗，棄去淋洗液，將小柱抽干，在用6 mL甲醇洗脫并收集洗脫液。

(3) 濃縮定容：50℃緩慢氮氣流條件下吹至近干，用1 mL 0.2%甲酸水溶液溶解，1000r/min旋渦混合1min，上液相 色譜-質譜儀檢測。

3、LC-MS/MS條件

色譜柱：Venusil ASB C18（2.1×150mm，5μm，100?）

質譜儀：API 4000

A:乙腈溶液；B:0.1%甲酸的水溶液

表1 流動相梯度洗脫程序

流速：0.3mL/min

柱溫：40℃

進樣體積:2uL

離子源：電噴霧（ESI），正離子模式 檢測方式：多反應監測（MRM）

表2 質譜儀離子源參數

表3 喹諾酮類藥物的母離子和子離子參數表

七、實驗結果

1、豬肉基質10μg/kg加標回收結果：

三個平行測試樣的平均回收率均大于80%，平行樣間相對標準偏差均小于5%，符合標準要求。（見表4）

表4 豬肉中10μg/kg加標回收實驗結果

2、空白樣品中添加喹諾酮類殘留物色譜圖

圖1 喹諾酮待測物總離子流圖                                           圖2 依諾沙星(Enox)(320.9/303.3)質譜圖