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侵襲小室實驗技術服務|實驗技術服務

來源:上海拜力生物科技有限公司   2015年05月15日 12:39  

關鍵詞:侵襲小室實驗技術服務|實驗技術服務
簡介:世界*品牌侵襲小室實驗技術服務|實驗技術服務原裝,質量保證,*。
侵襲小室實驗技術服務|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經驗及實驗操作技巧,承諾客戶不成功不收費。我們所有的實驗數據真實可信,我們提供原始的表達菌株和克隆質粒,客戶可以依據我們的實驗報告重復我們的實驗結果。
產品品牌:   http://www.。。com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序實驗流程:
侵襲小室小室制備
① 包被基底膜:
用50mg/LMatrigel 1:8稀釋液包被Transwell小室底部膜的上室面,4℃風干。如果需要在下室面鋪FN的話,可將200ul槍頭的剪掉,吸取FN均勻涂抹在小室的下面。用膠原(collagen)的話,一般配成0.5mg/ml,直接用槍吸了涂在膜上。
② 水化基底膜:
吸出培養板中殘余液體,每孔加入50ul含10g/LBSA的無血清培養液,37℃,30min。
另有tianjin_glioma戰友提供的方法:在上室的聚碳酸酯膜上加入稀釋后的Matrigel (3.9ug/ul) 60-80μl (注意體積不可太大,以剛把聚碳酸酯膜浸濕為),置37℃ 30min使Matrigel聚合成凝膠。
有基質膠的Transwell小室制備
Chemicon公司的ECM550系列說明書要求,將小室放入培養板中,在上室加入300μl預溫的無血清培養基,室溫下靜置15-30min,使基質膠再水化。再吸去剩余培養液。
制備細胞懸液
① 制備細胞懸液前可先讓細胞撤血清饑餓12-24h,進一步去除血清的影響。但這一步并不是必須的。
② 消化細胞,終止消化后離心棄去培養液,用PBS洗1-2遍,用含BSA的無血清培養基重懸。調整細胞密度至1-10×105。
具體實驗時采用密度要自己摸索,因為不同細胞,其侵襲能力是不同的。個人經驗,細胞量過多,穿過膜的細胞會過多過快,如果zui后用計數法統計結果的話將難以計數;而過少的話,可能還沒到檢測的時間點,所有的細胞都已穿過,因此zui少也要保證在收樣的時候,上室內還要有一定量的細胞存在。
個人認為,對照組和處理盡量不要分開計數,因為細胞數目的差異會嚴重影響實驗結果。如果需要對細胞預處理而不得不分開計數,那么計數一定要多重復幾次,力求準確,盡量保證對照組和處理組細胞密度一致。
接種細胞
① 取細胞懸液100-200μl加入Transwell小室,不同公司的、不同大小的Transwell小室對細胞懸液量有不同要求,請參考說明書。24孔板小室一般200μl。
② 24孔板下室一般加入500μl含FBS或趨化因子的培養基,不同的培養板加的量有不同要求,具體請參考說明書。這里要特別注意的是,下層培養液和小室間常會有氣泡產生,一旦產生氣泡,下層培養液的趨化作用就減弱甚至消失了,在種板的時候要特別留心,一旦出現氣泡,要將小室提起,去除氣泡,再將小室放進培養板。
③ 培養細胞:常規培養12-48h(主要依癌細胞侵襲能力而定)。時間點的選擇除了要考慮到細胞細胞侵襲力外,處理因素對細胞數目的影響也不可忽視。
通過給細胞染色,可在鏡下計數細胞
① 用棉簽擦去基質膠和上室內的細胞
② 染色:常用的染色方法有結晶紫染色、臺肦藍染色、Giemsa染色、蘇木精染色、伊紅染色等。
依據膜孔徑選擇適合您實驗用途的*膜:
0.4um型:掃描電鏡;光鏡下活細胞的觀察;免疫化學染色
0.4um高密度(孔多)型:小分子的運輸,擴散和分泌;TEER檢測;藥物生物活性檢測
1.0um型:光鏡下活細胞的觀察,分子的運輸,擴散和分泌;免疫化學染色;藥物生物活性檢測
3.0um型:光鏡下觀察;掃描電鏡;大分子和病毒的運輸;細胞遷移
3.0um高密度型:大分子和病毒的運輸,分泌和擴散;細胞遷移
8.0um型:腫瘤侵襲;細胞遷移;趨化研究;腫瘤轉移

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