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內皮細胞培養服務|實驗技術服務

來源:上海拜力生物科技有限公司   2015年05月15日 12:36  

關鍵詞:內皮細胞培養服務|實驗技術服務
簡介:世界*品牌內皮細胞培養服務|實驗技術服務原裝,質量保證,*。
內皮細胞培養服務|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經驗及實驗操作技巧,承諾客戶不成功不收費。我們所有的實驗數據真實可信,我們提供原始的表達菌株和克隆質粒,客戶可以依據我們的實驗報告重復我們的實驗結果。
產品品牌:   http://www.。。com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序實驗流程:
1.干粉培養基原倍液的配制
1)配制過濾除菌的細胞培養基
①閱讀培養基使用說明,確定需要添加何種添加劑(如NaHCO3、L-谷氨酰胺、丙酮酸鈉、HEPES等)。
②根據所需將培養基全部倒入一容器中,用少量注射用水(20℃~30℃)將袋內殘留培養基洗下整理并入容器。加注射用水至總體積的95%,輕微攪拌溶解。
③加入規定量的碳酸氫鈉及所要添加的物質。
④輕微攪拌溶解,加注射用水至規定體積。
⑤用1mol/L氫氧化鈉溶液或1mol/L鹽酸溶液調pH至所需值。
⑥用0.22μm濾膜正壓過濾除菌。
⑦溶液應在2℃~8℃下避光保存。
2.配制可高壓滅菌細胞培養基
①根據所需將培養基全部倒入一容器中,用少量注射用水(20℃~30℃)將袋內殘留培養基洗下,并入容器。加注射用水至總體積的95%,輕微攪拌溶解。
②在121℃、15psi下滅菌15分鐘。
③待溶液冷卻至室溫,加入無菌0.2mol/LL-谷氨酰胺溶液規定體積、無菌7.5%(w/v)碳酸氫鈉溶液規定體積,加注射用水(20℃~30℃)至規定體積,混勻。
④如果必要,用1mol/L氫氧化鈉溶液或1mol/L鹽酸溶液調pH至所需值。
⑤溶液應在2℃~8℃下避光保存。
內皮細胞易于從大血管分離培養成單層細胞,對于研究內皮細胞再生、腫瘤促血管生長因子(TAF)等有很大價值。
研究人內皮細胞培養以人臍帶靜脈灌流消化法zui為簡便,其法如下:
1、產后新鮮臍帶,無菌剪取10—15厘米長一段,如不能立即培養,可于12小時內保存于4℃。
2、用三通注射器吸取溫PBS液注入臍靜脈中洗去殘血,在入口處用線繩扎緊,以防液體返流。
3、用血管鉗夾緊臍帶一端,從另一端向臍靜脈中徐徐注入終濃度為0.1%的粗制膠原酶,充滿血管,消化3—10分鐘;注入口用線繩扎,以防液體返流。
4、吸出含有內皮細胞的消化液,于離心管中,注入溫PBS輕輕反復沖洗后,一并注入離心管中(此步驟可重復)。5、離心去上清,加入RPMI1640培養液制成細胞懸液,接種入培養器皿中,置溫箱培養。兩至三天可見細胞長成單層。

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