人可溶性血管內皮細胞蛋白C受體(sEPCR)ELISA試劑盒

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【實驗原理】：試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中指標的水平，用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入相應的抗原，再與HRP標記的抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的指標呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中指標的濃度/含量等。

【標本要求】：

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

人可溶性血管內皮細胞蛋白C受體(sEPCR)ELISA試劑盒

Materials provided with the kit

Materials provided with

the kit

48determinations 96 determinations Storage

User manual 1 1

Closure plate membrane 2 2

Sealed bags 1 1

Microelisa stripplate 1 1 2-8℃

Standard：10.8U/L 0.5ml×1 bottle 0.5ml×1 bottle 2-8℃

Standard diluent 1.5ml×1 bottle 1.5ml×1 bottle 2-8℃

HRP-Conjugate reagent 3ml×1 bottle 6ml×1 bottle 2-8℃

Sample diluent 3ml×1 bottle 6ml×1 bottle 2-8℃

Chromogen Solution A 3ml×1 bottle 6ml×1 bottle 2-8℃

Chromogen Solution B 3ml×1 bottle 6ml×1 bottle 2-8℃

Stop Solution 3ml×1 bottle 6ml×1 bottle 2-8℃

wash solution

（20ml×20 fold）

×1bottle

（20ml×30 fold）

×1bottle

2-8℃

Specimen requirements

1. serum- coagulation at room temperature 10-20 mins，centrifugation 20-min at the speed of

2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.

2. plasma-use suited EDTA, citrate or heparinized plasma as an anticoagulant,mix 10-20

mins ,centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If

precipitation appeared, Centrifugal again.

3. Urine-collect sue a sterile container, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m.

remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again. The Operation of

Hydrothorax and cerebrospinal fluid Reference to it.

4. cell culture supernatant-detect secretory components, collect sue a sterile container,

centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant,detect the

composition of cells, Dilut cell suspension with PBS（PH7.2-7.4）, Cell concentration

reached 1 million / ml, repeated freeze-thaw cycles, damage cells and release of

intracellular components, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove

supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.

5. Tissue samples- After cutting samples, check the weight,add PBS（PH7.2-7.4）, Rapidly

frozen with liquid nitrogen, maintain samples at 2-8℃ after melting,add PBS（PH7.4）,Homogenized by hand or Grinders, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m.

remove supernatant.

6. extract as soon as possible after Specimen collection,and according to the relevant

literature, and should be experiment as soon as possible after the extraction. If it can’t,

specimen can be kept in -20 ℃ to preserve, Avoid repeated freeze-thaw cycles.

7. Can’t detect the sample which contain NaN3, because NaN3 inhibits HRP active.

人可溶性血管內皮細胞蛋白C受體(sEPCR)ELISA試劑盒

【樣本的處理】：

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。

2. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。

3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

【注意事項】：

1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

1. 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。
2. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

【保存】：2-8℃

【保質期】：6個月