AdvCell^?骨髓間充質干細胞血清培養基

  AdvCell^?骨髓間充質干細胞血清培養基根據哺乳類生物干細胞的生長需要，包含必需和非必需氨基酸、維生素、有機和無機化合物、激素、生長因子、微量礦物質、胎牛血清以及其他補給成分。產品嚴格無菌，無病毒和支原體，性能穩定，使用該培養基能使干細胞在理想營養平衡狀態下進行多代擴增而不發生分化（至少在10代以內）。

★  產品內容

★  產品適用范圍

    適用于人及哺乳類來源的骨髓間充質干細胞的培養。

★  使用注意事項

1. *培養基的制備：將以上AdvCell^?  骨髓間充質干細胞血清培養基（BSM0001）中的AdvCell^? 

   骨髓間充質干細胞基礎培養基 （BM0001)、AdvCell^?  胎牛血清 （BS0001)、AdvCell^? 骨髓間充質干細

   胞培養添加劑（BSM0004）于37℃解凍并迅速混合。

2. *培養基的存儲：配制好的*培養基放在4℃冰箱避光保存，并盡量在一個月內使用完。

3. 根據需要，培養過程中可添加一定劑量青霉素∕鏈霉素(P∕S)。

4. 如客戶自制的凍存液凍存的細胞是用作臨床治療，應避免用甘油作為保護劑。

★  培養條件

    37℃，5% CO₂，無菌恒溫培養。

★  相關操作

【復蘇】

1.將*培養基放入37°C水浴中預熱；

2.從液氮中取出細胞迅速放入37°C水浴快速解凍（解凍后不要繼續孵育細胞）；

3.在超凈臺中加入5 ml的 *培養基重懸細胞，1000 rpm離心5 min；

4.棄上清,加入5 ml的*培養基重懸細胞，轉移到T-25細胞培養瓶中（帶濾芯）；

5.將培養瓶置于37℃，5% CO₂ 的無菌培養箱中培養；

6.第二天用新鮮的*培養基給細胞換液。

【培養】

1.在顯微鏡下觀察細胞，當細胞融合度達到80%時，即可傳代培養；

2.37℃水浴預熱培養基；

3.在超凈臺中，棄掉T-25細胞培養瓶中的*培養基，加入2 ml PBS清洗，再加入1 ml 0.25%胰酶-EDTA

  消化細胞；

4.在顯微鏡下觀察到細胞變圓，有細胞開始脫離瓶壁時，即可加入5 ml *培養基 終止消化；

5.用移液器輕輕吹打瓶壁上剩余的細胞，并輕輕吹打將細胞吹散；

6.將細胞轉移至15 ml離心管中，1000 rpm離心5 min；

7.棄上清,加入15-20 ml的 *培養基重懸細胞后轉入T-75細胞培養瓶中或按適當比例接種到T-25細胞培養瓶中（確保細胞貼壁后融合度在25-50%之間），細胞密度在1×10⁴cells/cm² (2.5×10⁵ cells/T-25  瓶），混合細胞懸液，確保細胞均勻分布；

8.將培養瓶置于37°C，5% CO₂ 的無菌培養箱中培養；

9.每兩天用新鮮、預熱的*培養基進行換液。

【凍存】

1. 細胞消化和計數，用胰酶對待凍存的細胞進行消化，并對細胞進行計數；

2. 1000 rpm離心5分鐘，去掉上清；

3. 根據細胞計數的情況，加入適量的凍存液，使細胞密度在1×10⁶/ml左右（或根據自己希望達到的細胞

   密度）；

4. 輕輕地重懸細胞（務必重懸均勻），將重懸的細胞按等份加入到滅菌的凍存管（需提前做好標記或者貼

   上標簽）中，旋緊凍存管蓋；

5. 將凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒直接放入-80℃；

6. 第二天將細胞從-80℃轉移到液氮中。