手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關(guān)注視頻號
問題:
不同色譜柱間差異
使用期間柱變化
原因:
填料、鍵合相不同
柱床破壞
鍵合相丟失
硅膠基質(zhì)溶解
強(qiáng)保留組分堆積堵塞
表現(xiàn):
保留因子(k)，分離因子(α)
柱效(N)
保留因子(k)，分離因子(α)
柱效(N)
保留因子(k)，柱效(N)
問題:
柱外效應(yīng)
原因:
系統(tǒng)差異、進(jìn)樣量大、進(jìn)樣閥與色譜柱之間、色譜柱與檢測器之間的管路太長、檢測器流通池體積大、接頭死體積大等。
表現(xiàn):
柱效（N)
問題:
分離效果變差
原因:
流動(dòng)相組分改變
流速改變
溫度改變
表現(xiàn):
保留因子(k)，柱效變化很小
保留因子(k)，分離因子（α）
保留因子(k)，柱效變化很小
問題:
柱平衡慢
原因:
重新平衡時(shí)間不夠
柱超載 樣品量太大
表現(xiàn):
保留因子(k)，柱效變化很小
保留因子(k)，柱效(N)
造成色譜峰（ 不對稱）拖尾的原因
1．色譜柱本身填裝問題,篩板堵塞或填料塌陷；
2．柱頭有污染；
3．樣品超載；
4．樣品溶劑不合適；
5．柱外效應(yīng)；
6．化學(xué)或二次保留（硅羥基）效應(yīng)；
7． 緩沖容量不足或不合適；
8． 重金屬污染。
如何解決峰形拖尾的問題
A. 與化學(xué)有關(guān)的拖尾問題
1．流動(dòng)相中，加入30mM的三乙胺（用于堿性化合物）或醋酸胺（用于酸性化合物）， 未知化合物加醋酸三乙胺；
2．如仍然拖尾，將三乙胺換為二甲基辛胺（或醋酸二甲基辛胺）；
3.降低進(jìn)樣量至<1μg。
B. 與色譜柱有關(guān)的拖尾問題
1.如柱頭處有強(qiáng)保留的樣品組分積聚，反相柱可用20倍柱體積的96%的二氯甲烷與4%甲醇，加1%氫氧化銨混合液沖洗；正向柱可用甲醇沖洗；
2.使用保護(hù)柱。
C. 與HPLC系統(tǒng)有關(guān)的峰拖尾和峰加寬
1.進(jìn)樣體積過大，（通常≤25μL）；
2.進(jìn)樣閥與色譜柱及檢測器之間的管路體積過大（*連接管應(yīng)<20cm，內(nèi)徑為0.007"）；
3.檢測器流通池的體積過大。
不同色譜柱間差異
使用期間柱變化
原因:
填料、鍵合相不同
柱床破壞
鍵合相丟失
硅膠基質(zhì)溶解
強(qiáng)保留組分堆積堵塞
表現(xiàn):
保留因子(k)，分離因子(α)
柱效(N)
保留因子(k)，分離因子(α)
柱效(N)
保留因子(k)，柱效(N)
問題:
柱外效應(yīng)
原因:
系統(tǒng)差異、進(jìn)樣量大、進(jìn)樣閥與色譜柱之間、色譜柱與檢測器之間的管路太長、檢測器流通池體積大、接頭死體積大等。
表現(xiàn):
柱效（N)
問題:
分離效果變差
原因:
流動(dòng)相組分改變
流速改變
溫度改變
表現(xiàn):
保留因子(k)，柱效變化很小
保留因子(k)，分離因子（α）
保留因子(k)，柱效變化很小
問題:
柱平衡慢
原因:
重新平衡時(shí)間不夠
柱超載 樣品量太大
表現(xiàn):
保留因子(k)，柱效變化很小
保留因子(k)，柱效(N)
造成色譜峰（ 不對稱）拖尾的原因
1．色譜柱本身填裝問題,篩板堵塞或填料塌陷；
2．柱頭有污染；
3．樣品超載；
4．樣品溶劑不合適；
5．柱外效應(yīng)；
6．化學(xué)或二次保留（硅羥基）效應(yīng)；
7． 緩沖容量不足或不合適；
8． 重金屬污染。
如何解決峰形拖尾的問題
A. 與化學(xué)有關(guān)的拖尾問題
1．流動(dòng)相中，加入30mM的三乙胺（用于堿性化合物）或醋酸胺（用于酸性化合物）， 未知化合物加醋酸三乙胺；
2．如仍然拖尾，將三乙胺換為二甲基辛胺（或醋酸二甲基辛胺）；
3.降低進(jìn)樣量至<1μg。
B. 與色譜柱有關(guān)的拖尾問題
1.如柱頭處有強(qiáng)保留的樣品組分積聚，反相柱可用20倍柱體積的96%的二氯甲烷與4%甲醇，加1%氫氧化銨混合液沖洗；正向柱可用甲醇沖洗；
2.使用保護(hù)柱。
C. 與HPLC系統(tǒng)有關(guān)的峰拖尾和峰加寬
1.進(jìn)樣體積過大，（通常≤25μL）；
2.進(jìn)樣閥與色譜柱及檢測器之間的管路體積過大（*連接管應(yīng)<20cm，內(nèi)徑為0.007"）；
3.檢測器流通池的體積過大。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對其真實(shí)性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí)，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購中心