九、RT-PCR
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在*條件下進行。
實驗步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
十、實時熒光定量PCR(Q—PCR)(Real-time Quantitative PCR )
利用熒光信號的變化實時檢測PCR擴增反應中每一個循環擴增產物量的變化,通過Ct值和標準曲線的關系對起始模板進行定量分析。
閾值:是循環開始3~15個循環的熒光信號的標準偏差的10倍,設定在擴增曲線指數增長期。
C(t)值:熒光信號(擴增產物)到達閾值時所經過的擴增循環次數。
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