首先我們這邊先來看下這樣的問題:新消化獲得的細胞直接染色立馬上機檢測,這一步是不是必須的?RnaseA的作用包不包括去處胞內的雙鏈RNA?是的話,RnaseA能直接穿膜嗎?不是的話,胞內的雙鏈RNA不管了?陰參的設定是不是健康成人外周血的淋巴細胞就可以了?
根據這樣的染色方法而定,原理都是先打孔再染色,因為PI沒有穿膜作用。所以不同就在打孔的方法上。現在基本有兩種方法,一種就是乙醇固定。70-75%濃度效果都差不多,優點是作用比較輕柔,可長時間固定,一般一個月都沒問題,更長時間我沒試過。適用于不能預計上機時間的朋友,可以先固定好幾批細胞然后再一起染色上機。缺點就是打孔時間較長,至少過夜才能保證打孔效果。
根據這樣的染色方法而定,原理都是先打孔再染色,因為PI沒有穿膜作用。所以不同就在打孔的方法上。現在基本有兩種方法,一種就是乙醇固定。70-75%濃度效果都差不多,優點是作用比較輕柔,可長時間固定,一般一個月都沒問題,更長時間我沒試過。適用于不能預計上機時間的朋友,可以先固定好幾批細胞然后再一起染色上機。缺點就是打孔時間較長,至少過夜才能保證打孔效果。
另一種就是用Triton打孔,這種方法比較激烈。優點是速度快,消化以后可以馬上打孔染色上機,而且不使膜蛋白變性,不容易造成粘連。缺點就是不能長時間保存樣品,一般好半個小時內檢測,不然時間越久細胞DNA含量的離散度越高,圖像越難看。不過現在很多的試劑盒都是用這種快速打孔的方式。
膜通透性改變以后酶可以進去。
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