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做ELISA試劑盒實驗已是輕車熟路了

來源:上海撫生科技發展有限公司   2014年08月04日 14:35  

做ELISA試劑盒實驗已是輕車熟路了

    ELISA試劑盒檢測系統可謂是免疫學反應應用到科研出產中zui為敏捷的技術手段。自己也為此苦惱過很長一段時間,跟著自己技術水平得進步,或多或少地也把握了ELISA試劑盒體系的脾氣,也是熟能生巧吧,現在做方陣,以前檢測一種抗體用整整一下戰書還算得暈暈的,現在給我十個八個的從包被到顯色,一個工作日基本搞定。ELISA試劑盒可是在新老手操縱過程中老是會泛起或大或小的題目,本人在剛開始做ELISA試劑盒時就面對良多災題,固然有師兄師姐鋪路,但仍是經常做得烏煙瘴氣,好比說花板,假陽性,全顯色,全部顯色,顯色比空缺還低。

    常用封鎖劑有:0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明膠;脫脂奶粉,比較價廉,可以高濃度使用(5%-10%);還有一些稀有用到的各種動物血清(主要為了排除相似蛋白干擾)和酪蛋白等等。詳細的試驗還要有堅固的理論外也要實踐,ELISA試劑盒看一下*可不可以應用到自己試驗當中去。但*選用什么,要依據試驗詳細來實踐。

    包被原的性質很重要,蛋白濃度,是否降解,這關系到你做出的抗體可不可以被其識別,所以保留抗原很重要,我做重組蛋白時,ELISA試劑盒師兄都嚴格警告我一定要在冰浴下緩慢融化就是這個道理。封鎖就是讓大量不相關的蛋白質充填這些曠地空閑,從而排斥ELISA試劑盒后的步驟中干擾物質的再吸附。但有時因為ELISA試劑盒試驗的需要,包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來包。還有有的包被原可能不是蛋白,對于生物素和脂類物質或小分子物質我們要事先對其改造再加以包被,ELISA試劑盒親和素生物素:先親和素先包被載體,加入生物素化的DNA,這種包被方法平均、牢固,已擴大應用于各種抗原物質的定量ELISA試劑盒測定。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液,還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。

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