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ELISA試劑盒但應避免反復凍融

來源:上海撫生科技發展有限公司   2014年07月31日 11:16  

ELISA試劑盒但應避免反復凍融

實驗原理:  

  本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人乙酰肝素酶(HPA)水平。用純化的人乙酰肝素酶(HPA)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入乙酰肝素酶(HPA),再與HRP標記的乙酰肝素酶(HPA)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的乙酰肝素酶(HPA)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人乙酰肝素酶(HPA)濃度。

ELISA試劑盒回收率是反應待測物在樣品分析過程中的損失的程度,損失越少,回收率越高,如果作標液1PPM,就是1毫克/升,而作出標準數據為0.99毫克/升,就是說你的回收率是99%,這個與真實成分有密切的關系,說明方法的準確度。ELISA試劑盒比如水中總無機氯含量測定, ELISA試劑盒樣品水中含有無機氯 20 mg/L, 取 100mL 被測水樣品, 加入 0.1mL 濃度為 10mg/mL 的含無機氯標準樣品, 測定時忽略體積變化, 如果測定出樣品中無機氯為 2.98mg/L, ELISA試劑盒則認為回收率為98%。

樣本處理及要求:

1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。

2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。

3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,

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