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液相色譜填料應如何選擇

來源:天津市蘭博實驗儀器設備有限公司   2014年07月15日 16:04  
   液相色譜是目前應用zui多的色譜分析方法,液相色譜系統由流動相儲液體瓶、輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器和記錄器組成,其整體組成類似于氣相色譜,但是針對其流動相為液體的特點作出很多調整。HPLC的輸液泵要求輸液量恒定平穩;進樣系統要求進樣便利切換嚴密;由于液體流動相粘度遠遠高于氣體,為了減低柱壓液相色譜的色譜柱一般比較粗,長度也遠小于氣相色譜柱。HPLC應用非常廣泛,幾乎遍及定量定性分析的各個領域。

  現代液相色譜儀色譜中,分離效果好壞很大程度上取決于色譜填料的選擇。但是色譜填料的選擇范圍很寬,要做合適的選擇,必須對此有一定的認識和了解。

  一、硅膠基質填料:

  1、正相色譜

  正相色譜用的固定相通常為硅膠(Silica)以及其它具有極性官能團,如胺基團(NH2,APS)和氰基團(CN,CPS)的鍵合相填料。

  由于硅膠表面的硅羥基(SiOH)或其它極性基團極性較強,因此,分離的次序是依據樣品中各組份的極性大小,即極性較弱的組份zui先被沖洗出色譜柱。

  正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低,如:正己烷(Hexane)、氯仿(Chloroform)、二氯甲烷(Methylene Chloride)等。

  2、反相色譜

  反相色譜用的填料常是以硅膠為基質,表面鍵合有極性相對較弱的官能團的鍵合相。反相色譜所使用的流動相極性較強,通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物。

  樣品流出色譜柱的順序是極性較強的組份zui先被沖洗出,而極性弱的組份會在色譜柱上有更強的保留。

  常用的反相填料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。

  二、聚合物填料

  聚合物填料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸酯等,其主要優點是在pH值為1~14均可使用。

  相對于硅膠基質的C18填料,這類填料具有更強的疏水性;大孔的聚合物填料對蛋白質等樣品的分離非常有效。

  現有的聚合物填料的缺點是相對硅膠基質填料,色譜柱柱效較低。

  三、其它無機填料

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