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液相色譜柱使用注意事項

來源:南昌捷島科學(xué)儀器有限公司   2014年07月03日 13:09  

液相色譜柱使用注意事項

 

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色譜柱在使用前,進行柱的性能測試,并將結(jié)果保存起來,作為今后評價柱性能變化的參考。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外,在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是佳條件),只有這樣,測得的結(jié)果才有可比性。
     1、樣品的前處理:
     a、使用流動相溶解樣品。
     b、使用予處理柱除去樣品中的強性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。
     c、使用0.45µm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。
     2、流動相的配制:
     液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達到分離的目的,因此要求流動相具備以下的點:
     a、流動相對樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)
     b、流動相具有一定惰性,與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(殊情況除外)
     c、流動相的黏度要盡量小,以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果;同時降低柱壓降,延長液體泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度)
     d、流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器,使用對紫外吸收較低的溶劑配制。
     e、流動相沸點不要太低,否則容易產(chǎn)生氣泡,導(dǎo)致實驗無法進行。
     f、在流動相配制好后,一定要進行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測,還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
     3、流動相流速的選擇:
     因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù),使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根定的色譜柱,要追求佳柱效,使用佳流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱,流速一般選擇1mlmin,對于內(nèi)徑為4.0mm柱,流速0.8mlmin為佳。
     當選用佳流速時,分析時間可能延長。可采用改變流動相的洗滌強度的方法以縮短分析時間(如使用反相柱時,可適當增加甲醇或乙腈的含量)
    
    
注意:
     a.由于甲醇廉價,對于反相柱推薦使用甲醇體系(必須使用乙腈的場合除外)
     b.對于正相柱推薦使用沸程為30-60℃的石油醚或提后的己烷作流動相,沒有提的己烷不得使用。用水使用超水(電阻率大于18兆歐),去離子水及雙蒸水中含有酚類雜質(zhì),有可能影響分析結(jié)果。
     c.含水流動相*在實驗前配制,尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要隔夜。加入*,防止細菌生長。
     d.流動相要求使用0.45 µm濾膜過濾,除去微粒雜質(zhì)。
     e.使用HPLC級溶劑配制流動相,使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命,提高柱性能

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