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滬鼎推薦本周Z值得關注的實驗,述制備核提取物的完整過程

來源:上海滬鼎生物科技有限公司   2014年02月27日 09:53  

    一周之中的工作日不過只有五天,時間的緊張是否讓您不知該瀏覽哪一個實驗了呢?不管是何事物,足夠才是zui重要的。今天已經周四了,滬鼎推薦本周zui值得關注的實驗,述制備核提取物的完整過程。上海滬鼎以質量求生存,以信譽求發展的精神,精益求精,力求做到更好!
    本次實驗一共需要十二個步驟,看似麻煩,我們為您逐條整理好,讓您了解中更明白。
1、①收集轉瓶培養的細胞:將濃度為5~10×108細胞/l 的培養液用1 L 的塑料瓶1 850 g 離心20 min,將細胞收入50 ml 錐形離心管中(每管收2~3 L 培養液中的細胞)。進行步驟2。②收集單層培養的細胞:單層細胞長滿后去掉培養液。用PBS洗1次。將細胞刮入新鮮PBS液里,倒進錐形離心管中。進行步驟2。
2、1 850 g 離心10 min。
3①轉瓶培養細胞:測量壓緊后細胞的體積。將細胞重懸于約5倍于其pcv的PBS液中,1 850 g 離心10 min。進行步驟4。②單層培養細胞:測量pcv,進行步驟4。
4、快速地將沉淀的細胞重懸于5倍體積的低滲緩沖液中,1 850 g 離心10 min。將細胞沉淀重懸于3倍于原pcv的低滲緩沖液中,放置在冰上10 min,讓細胞腫脹。
5、在Dounce氏玻璃勻漿器中用B號研杵緩饅上下抽提10次以上。用臺盼藍染色排斥法在顯微鏡下檢査細胞裂解滑況(應大于80%~90%)。
6、3 300 g 離心15 min,保留上清用來制備S-100細胞質提取物。
7、測量第6步離心沉淀的壓緊后的細胞核體積。用1/2 pnv體積的低鹽緩沖液重懸細胞核(必要時用Dounce氏玻璃勻漿器勻漿一次)。
8、在輕輕攪拌的同時,逐滴加入1/2 pnv體積的高鹽緩沖液。終濃度應約為300 mmol/l。
9、25 000 g 離心30 min,測量核提取物的電導率(用上請,見步驟10)。
10、將核提取物加入透析管中,在50倍體積的透析液中進行透析,直到提取物的電導率和透析液一致為止(當提取物的KCl濃度達到100 mmol/l 時)。盡量縮短透析時間。
11、將提取物從透析袋中移出45 000 g 離心20 min。
12、用Bradford分析法測定上清中蛋白質的濃度。分裝,浸入液氮中速凍,- 80℃保存。
    以上就是制備核提取物實驗的十二個完整過程,感謝您對上海滬鼎的支持!在廣大客戶的支持和全體員工的努力下,公司正在日益發展和壯大。全體員工孜孜不倦為國內科研事業單位以及高校等提供的產品服務!

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