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您看滬鼎培養大鼠胰島細胞,八步即能完成實驗

來源:上海滬鼎生物科技有限公司   2014年02月20日 09:48  

    這是一項比較熱門的實驗,如果您需要用到、了解的話可以拿出空余的兩分鐘時間來閱讀下面的文章。我們把本實驗的步驟分為了八個部分,下面就來分條說明。 
    試劑都是有它的配制方法的,這里的實驗是培養大鼠胰島細胞,在我公司中所能看見的大鼠二字也就是試劑盒方面了,其中的種屬大鼠是非常熱銷的。我們在做這個實驗的*步就是要將一周齡Wistar大鼠斷頸處死,熱愛動漫的朋友有沒有莫名的想到了兵長呢?然后就要把它放于75%乙醇浸泡15 分鐘,無菌取出胰腺,于冰冷無菌D-Hanks’液中漂洗,用眼科剪仔細清除脂肪、包膜、血管等胰外組織,轉入青霉素小瓶中。
    第二個步驟就是要加入少量無菌D-Hanks’液,用眼科剪剪成0.1-1.0 mm3 大小的碎片,用滴管輕輕吸出上層細小脂肪碎塊和油滴,再用無菌D-Hanks’液反復清洗 8~10 次,加入10 倍體積無菌消化酶液[胰蛋白酶-膠原酶消化液:0.05  g 胰蛋白酶,0.025 g Ⅴ型膠原酶(663 U/mg),0.05 g 葡萄糖,溶于100mL 無Ca2+、Mg2+的0.01 mol/L PBS(pH 值為 7.4)溶液,用0.22 µm 微孔濾膜濾菌],38℃±1℃消化,消化過程中不斷震蕩,10 分鐘后棄去上清液。
    那么多的數字文字看上去有些眼花繚亂啊,其實操作時會發現沒有那么麻煩的。
    我們第三步要用無菌D-Hanks’液將組織塊清洗 2~3 次,加入新鮮酶液繼續消化,重復上述步驟,此時組織塊邊緣模糊。
    第四個步驟的時候要將組織塊浸入消化酶液中,38℃±1℃消化10 分鐘,將消化酶液與組織塊分開,組織塊重新加入新鮮消化酶液進行消化;而原消化酶液1500  rpm離心 10 分鐘,取沉淀即為消化下的細胞,重新用無菌D-Hanks’懸浮,離心,重復 1~2 次,再用培養基洗 2~3 次,用培養基懸浮即得細胞懸液。
    實驗過程到這里已經說了一半了,為了完成漂亮的實驗,您在操作的時候也要注意一些小細節部分
    我們第五步的時候,要將消化過的組織塊重復消化5~6 次至組織塊消化*,重復以上操作。
    第六步,合并幾次所得細胞懸液,計數,調整細胞濃度為 2×105個細胞/mL,將細胞懸液接種于24 孔塑料培養板中,每孔1 mL,置于37℃,5%CO2,飽和濕度培養箱中培養。
    文章看起來前面文字密密麻麻,中間有些松散。這里也能夠看出,前面的步驟流程是比較多的,到了中間就會稍微的簡單一些,因為步驟上有重復上面的,做過了的再次重復就會簡單一點。
    到了第七步的時候,由于成纖維細胞貼壁要比胰島細胞迅速,接種15 h 后,輕輕振蕩培養板,將上面未貼壁的細胞接入新的培養板中,可除去部分成纖維細胞。
    第八步,將新培養板中細胞培養 48 小時后,換新鮮配置的含有2.5 ng/mL 的碘乙酸的培養基培養5 h,可除去絕大部分成纖維細胞,而胰島細胞不受傷害,換不含碘乙酸的培養基洗2 次,并換不含碘乙酸的培養基在 37℃、5% CO2,飽和濕度培養箱中培養。
    我們要每隔3天換培養液,獲得單層胰島細胞。
    您看滬鼎培養大鼠胰島細胞,八步即能完成實驗。開學迎來,您需要大鼠elisa試劑盒的話現在個訂購七折優惠!本實驗中我們需要用到的試劑有:
1、D-Hanks’液
2、蛋白酶
3、Ⅴ型膠原酶
4、葡萄糖
5、碘乙酸
     歡迎您購買我公司產品,在您實驗的過程中,如果遇到了產品以及技術的問題來電即可,我們將為您安排技術人員給您做全程的實驗指導。

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