實時熒光定量PCR技術(Real-time quantitative Polymerase Chain Reaction簡稱Real Time PCR)是在定性PCR技術基礎上發展起來的核酸定量技術。
實時熒光定量PCR技術于1996年由美國Applied biosystems公司推出,在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程,使每一個循環變得“可見”,后通過Ct值和標準曲線對樣品中的DNA(orcDNA)的起始濃度進行定量的方法。
實時熒光定量PCR是目前確定樣品中DNA(或cDNA)拷貝數敏感、準確的方法。如果用于RNA檢測,這被稱為逆轉錄實時PCR即(Real-time RT-PCR)是實時PCR法,它是指對DNA或經過反轉入(RT-PCR)的RNA通過聚合酶鏈式反應并實時監測DNA的放大過程,在擴增的指數增長期就測量擴增產物,因為擴增指數增長期測量值與特異DNA(RNA)起始量存在相關性,從而實現定量檢測。RealTime PCR的基本目標是測量和鑒別非常微量的特異性核酸,從而可通過監測CT值而實現對原始目標基因的含量定量。實時熒光定量PCR法大的優點是克服了終點PCR法進入平臺期或叫飽和期后定量的較大誤差,實現DNA/RNA的定量。該技術不僅實現了對DNA/RNA模板的定量,而且具有靈敏度和特異性高、能實現多重反應、自動化程度高、無污染、實時和準確等特點,該技術在醫學臨床檢驗及臨床醫學研究方面有著重要的意義。
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