操作過程中的問題造成假陽性
在常見的elisa檢測實(shí)驗(yàn)中,有很多的過程都會導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗,一點(diǎn)小小的誤差也不能盡人意,所有操作過程中一定要注意這些方面,保證實(shí)驗(yàn)成功。
3、1加樣
對于間接ELISA標(biāo)本一般都要進(jìn)行稀釋,如果加樣不準(zhǔn)就會造成誤差,尤其當(dāng)稀釋倍數(shù)大時,很小的誤差,會導(dǎo)致較大的相對誤差,使陰性(或弱陽性)標(biāo)本呈陽性(或陰性)。加樣時應(yīng)將所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產(chǎn)生氣泡。目前,大部分血站都已使用全自動酶免加樣系統(tǒng)處理標(biāo)本,可較好地避免以上誤差。
3、2洗滌
在ELISA中正確的洗滌是保證得到可重復(fù)結(jié)果的關(guān)健一步,應(yīng)引起操作者重視。無論是手工操作還是機(jī)器操作,得出不正確的結(jié)果常與不正確的洗滌有關(guān),ELISA就是靠洗滌來達(dá)到分離游離和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過洗滌以消除殘留在板孔中沒能與固體抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),以及在反應(yīng)過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
3、3 溫育
每種試劑都有其*反應(yīng)模式,其中溫度和溫育時間控制是重要因素。因孵育溫度高,反應(yīng)時間長,會造成整板本底高,陽性率高。溫育一般用濕盒或水浴,反應(yīng)板不宜疊放,以保證各板溫度都能迅速平衡,為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋。
3、4酶標(biāo)儀判讀
作為記錄測定結(jié)果的儀器,酶標(biāo)儀的性能穩(wěn)定與否,決定結(jié)果的可靠度。首先酶標(biāo)儀應(yīng)定期進(jìn)行保養(yǎng),對濾光片要定期校正;其次酶標(biāo)儀波長設(shè)置要正確,使用雙波長,一個檢測波長,一個參比波長,以消除微孔板底部劃痕、不平、指印或液面高度差異造成的光干擾。此外,在用酶標(biāo)儀讀數(shù)時先擦試微孔板底部并壓平板條。由于各種酶標(biāo)儀性能有所不同。
以上四種方法都有可能在elisa試劑盒檢測上令結(jié)果不一樣,從而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗,我司技術(shù)在經(jīng)過多次實(shí)驗(yàn)中得出以上結(jié)論,所以elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)?zāi)芊癯晒θQ于多方面的因素,我司所售elisa試劑盒均可保證質(zhì)量,提供免費(fèi)技術(shù)指導(dǎo)及實(shí)驗(yàn)代測服務(wù),為您節(jié)省時間,提高實(shí)驗(yàn)成功度,咨詢關(guān)于elisa試劑盒的任何問題。我們恭候您的光臨。
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