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血管生成抗體芯片研究麥冬多糖對內皮細胞瘦素表達的影響

來源:北京華夏遠洋科技有限公司   2013年09月15日 19:23  

目的:應用血管生成抗體芯片技術探討麥冬多糖MDG-1對體外培養的人微血管內皮細胞 (HMEC-1) 瘦素表達的影響。

方法:使用血管生成抗體芯片技術檢測不同濃度MDG-1處理后人微血管內皮細胞中多種生長因子的變化情況,確定與其治療冠心病和糖尿病作用相關的生長因子;然后利用RT-PCR方法檢測MDG-1對瘦素mRNA表達的影響。結果:抗體芯片結果顯示MDG-1對多種生長因子都有調節作用,其中0.2、1、10 mmol/L MDG-1對瘦素蛋白表達均有明顯的抑制作用,RT-PCR結果也表明MDG-1可以抑制瘦素mRNA表達。

 MDG-1可以顯著抑制人微血管內皮細胞瘦素mRNA和蛋白的表達,MDG-1治療冠心病和糖尿病作用可能與調節瘦素表達有關。

瘦素 (1eptin) 又稱“消脂素”,是肥胖基因 (obese gene) 的產物,是由脂肪組織分泌的一種蛋白質激素,通過與其受體結合發揮抑制食欲、減少能量攝入、增加能量消耗、抑制脂肪合成、調節機體脂肪沉積的作用,Zhang[1]等于1994年首先闡明其基因、分子結構及生理作用。近年來的研究發現,瘦素與冠心病、2型糖尿病、肥胖、脂肪肝等多種生理病理過程密切相關[2]。

麥冬為百合科沿階草屬植物麥冬Ophiopogon japonicus (Thunb.) Ker-Gawl.干燥塊根,是常用滋陰中藥,具有養陰生津,潤肺清心的功能,臨床用于冠心病、心絞痛、糖尿病的治療取得一定療效。麥冬多糖 (MDG-1) 為從麥冬中分離純化得到的均一分子量β-D-果聚糖[3],前期藥理學研究表明,MDG-1具有抗心肌缺血損傷的作用[4],并對治療糖尿病一定的效果。血管生成抗體芯片技術是近幾年國外快速發展并逐漸成熟起來的生物技術[5, 6],可以快速而準確地檢測樣本中多種生長因子的表達情況,國內還未見該技術的應用報道。在本研究中,借助血管生成抗體芯片技術的優勢,我們對多種生長因子基因在MDG-1處理后人微血管內皮細胞中的表達情況進行了研究,發現瘦素可能是與MDG-1治療糖尿病和冠心病作用相關的生長因子;而后又利用RT-PCR方法檢測瘦素mRNA表達的影響,為進一步研究MDG-1作用機制提供依據。

細胞因子檢測是判斷機體功能的一個重要指標,在疾病的診斷、療效判斷及監測方面有重要意義,研究細胞因子也有助于闡明分子水平的調節機制。傳統的細胞因子蛋白表達水平檢測方法存在許多缺點,如敏感度不夠高、一次僅能檢測單個或幾個蛋白。近幾年隨著生物技術的快速發展并逐漸成熟起來,抗體芯片技術成為解決上述技術缺點的典型代表。芯片的設計基于雙抗體夾心法原理,使得抗體芯片具有靈敏度高、特異性好、重復性佳、準確性高、樣品用量少的優點,大多數蛋白的檢測靈敏度可達pg水平,且檢測蛋白表達水平勝過RNA水平,可以快速而準確地檢測樣本中多種生長因子的表達情況,從而確定待測樣本中有關因子的表達變化,具有非常廣闊的應用前景。

瘦素介導了代謝、內分泌及與肥胖有關的心血管疾病的發生。近年來,研究發現瘦素與冠心病發生相關的機制可能與其促進血栓形成,調節炎癥反應,誘導氧化應激,增加交感神經興奮性,引起內皮功能紊亂等作用有關。高瘦素血癥與冠心病的發病密切相關,瘦素水平可能是冠心病的一個新的危險因素[9]。

瘦素還與胰島素抵抗的發生關系密切[10]。胰島素抵抗(IR)是2型糖尿病的重要特征之一,IR是糖耐量減退或糖尿病、高胰島素血癥、高血壓、肥胖、高脂血癥等的共同發病基礎。瘦素缺乏和高瘦素血癥均可導致IR。由于瘦素抵抗,瘦素不能抑制胰島素分泌,導致高胰島素血癥。一方面,瘦素持續升高,使瘦素作用于下丘腦的受體解離,使瘦素產生飽感及能量消耗的作用減弱,脂肪-胰島素軸失調;另一方面,瘦素不能抑制胰島素分泌,出現高胰島素血癥,后者進一步促進脂肪合成增加,脂肪組織合成及分泌瘦素增加,結果是瘦素與胰島素的雙向調節作用被破壞,形成惡性循環。高胰島素血癥的后果是促進脂肪合成,形成肥胖,zui終導致胰島素敏感性下降,發生糖尿病。

近十多年來糖化學、糖生物學的研究方興未艾。人們發現糖類參與了生命現象中細胞的各種活動,具有多種多樣的生物學功能。目前植物多糖的生物活性研究報道日益增多。前期實驗發現麥冬多糖MDG-1具有抗心肌缺血損傷和治療糖尿病的作用。本研究表明,MDG-1對多種生長因子都有調節作用,其中對瘦素mRNA和蛋白的表達均有明顯的抑制作用,說明MDG-1治療冠心病和糖尿病作用機理可能同調節瘦素通路有關。這一結果是對其以往藥理研究成果的重要補充,為其臨床應用提供了有利依據。對其他同MDG-1作用相關的生長因子的研究也將進一步展開。

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