客戶在做抗體抗原實驗時,經常會向我們技術部咨詢關于抗體抗原實驗影響存在哪些因素,對此我司技術做出了詳細的解答,近年來隨著免疫化學、細胞生物學和分子生物學的發展,以及各種現代技術在免疫學中的應用,使免疫學技術建立了許多微量、快速、特異、靈敏并能進行自動化檢測和數據分析處理的新方法。
抗原—抗體結合過程可分為兩個階段:*階段為特異性結合階段,此階段反應迅速,在數秒鐘至數分鐘內完成,但無可見反應;第二階段為可見反應階段,歷時數分鐘至數小時,此階段易受以下因素的影響。
1)電解質 抗原抗體結合后由親水膠體變為疏水膠體,此時易受電解質影響。通常在抗原抗體反應中,以8.5g/L NaCl溶液作為抗原抗體的稀釋液及反應液,其中Na+和Cl-可分別中和膠體顆粒上的電荷,使膠體顆粒的電勢下降,形成可見的沉淀物或凝集物。若無電解質存在,則不出現可見反應。但如果電解質濃度過高,則會出現非特異性蛋白質沉淀,即鹽析。
2)酸堿度 pH過高或過低都可影響抗原和抗體的理化性質。例如,當pH為3左右時,可出現非特異性酸凝集。此時因接近細菌抗原的等電點,細菌表面蛋白或其他基團所帶的電荷消失,其間互相的排斥力喪失而導致凝集,影響試驗的可靠性。抗原抗體反應一般以pH6~pH9為宜。
3)溫度 抗原抗體反應zui適溫度為37℃。一般在15℃~40℃范圍內進行,在此范圍內,溫度越高,分子運動速度加快,增加抗原抗體接觸機會,反應速度越快,但亦容易引起復合物解離;溫度越低,反應速度緩慢,但抗原抗體結合牢固,易于觀察。某些特殊的抗原抗體反應需要特定的溫度,如冷凝集素在4℃時與紅細胞結合,20℃以上反而解離。
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