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使用分光光度法檢測DNA純度和計算DNA含量

來源:廣州市默菲儀器有限公司   2013年05月23日 15:08  

 

 
DNA在260nm處吸收強烈,OD260值為1的溶液相當于大約50μg/mL雙鏈DNA,而蛋白質的特征吸收在280nm處,測定DNA提取物中260nm處和280nm處的吸收值OD260和OD280,可大致判斷所提取的DNA的純度。OD260/OD280的值在1.7~1.9之間,說明提純度較好,低于1.7,說明提取的DNA中殘留有較多的蛋白質,可用酚、氯仿繼續抽提;若大于2.0,說明有RNA污染或DNA鏈斷裂。提取的DNA量可用下式計算:
P=cV
式中,c為DNA濃度,單位為μg/mL;V為提取的DNA溶液的體積,單位為mL。
如提取的DNA樣品為2mL,進行OD260值測定的檢測樣品為0.1mL+0.9mL TE緩沖液=1mL,DNA的稀釋倍數=1mL/0.1mL=10倍,OD260和OD280值分別為0.63和0.35,則:
純度= OD260/OD280=1.8。
樣品中DNA濃度c=50μg/mL * OD260 * 稀釋倍數=50μg/mL * 0.63 * 10 =315μg/mL
提取得到的DNA樣品量是:P=315μg/mL * 2mL =0.630mg。
 
廣州默菲提供了多種型號的紫外分光光光度計可以實現對DNA的檢測。

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