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細胞學技術的一般環節

來源:金壇市精達儀器制造廠   2010年01月20日 20:44  

一、紡錘體阻斷劑(Spindle inhibitor)
在有絲分裂過程中,隨著紡錘絲的形成,染色體被牽引到一起難以觀察其形態。紡錘體的形成在于細胞質和紡錘體成分的粘度之間的平衡,因
此,改變細胞質的粘度,即可破壞紡錘體形成,從而使得染色體均勻散開,且染色體縊痕區更為清楚。
在培養中使用的紡錘體阻斷劑為秋水仙素,在終止培養前加入適量秋水仙素,使正在分裂的細胞停留在中期,以獲得大量分裂相供分析之用。秋
水仙素的濃度范圍比較寬,一般使用濃度0.05—0.8微克/毫升,在終止培養前處理2—4小時。但在實際工作中需要借助濃度和處理時間來控制染色
體的收縮程度。秋水仙素作用時間越長,被阻斷的中期分裂相越多,但是染色體也越凝聚和收縮,所以還視各實驗室經驗而定。
二、低滲液(hypotonic solution)
低滲液是指滲透壓和離子強度均低于正常細胞生理條件的溶液,例如水、低滲的檸檬酸鈉或氯化鈉、甘油磷酸鉀(0.65M)、氯化鉀(0.075M)
等。低滲效果取決于低滲液的化學組成、低滲的溫度和處理時間。低滲處理是憑借反滲透作用使細胞膨脹染色體鋪展,同時可使粘附于染色體的核
仁物質散開,以便能在一個平面上觀察所有染色體形態。
實驗室中一般選用0.075M KCl為低滲液(具體情況取決于實際操作,鑒于實驗的連續性和穩定性,本實驗室采用0.35%KCl),其優點有:①染
色體輪廓清楚,可染色性強,染色時間短,②用于顯帶染色時能充分顯示帶型特點。
低滲處理為37℃,15-25分鐘,以預實驗條件為準。
三、固定液
固定液的重要特性是能迅速穿透細胞,將其固定并維持染色體結構的完整性,還要能夠增強染色體的嗜堿性,達到優良染色效果。
單純的固定液一般難以達到這些要求,因此在實驗中使用兩種混和的固定液。由于Carnoy首先使用的甲醇和冰乙酸混合液而稱的卡諾氏固定液是
效果良好的固定液。Carnoy固定液(甲醇:冰乙酸=3:l)每次使用前需臨時配制,長時間放置影響固定效果,固定時間15分鐘至24小時,冰箱、室
溫均可。必要時可改變甲醇和冰乙酸的比例,冰乙酸比例增加,利于細胞膨脹、染色體鋪展,但易導致細胞破裂、染色體散失。
四、滴片
滴片使細胞懸液從一定高處落在載玻片上,淋巴母細胞膜破裂,染色體分散開。載玻片可用冰片和干片,效果均好。滴片后需空氣干燥。
五、Giemsa染色
Giemsa染料不是一種單一染料,而是天青、伊紅、甘油和甲醇的混合物,配制后原液儲存。在常規染色中,并不比其他染料*,但在顯帶技術
中,卻是*的。
Giemsa工作液在使用前臨時配制,濃度可在2.5-10%之間(原液2份加pH7.4磷酸緩沖液10-40份)。染色后,染色質呈紅色,細胞核是藍色。
金壇市精達儀器制造廠
 

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