深低溫保藏細胞的解凍
深低溫保藏的細胞十分脆弱,要輕柔操作。快速解凍深低溫保藏
的細胞,然后直接將其接種到*生長培養(yǎng)基中,如果細胞對抗
凍劑(DMSO或甘油)特別敏感,則離心除去抗凍劑,然后將細胞
接種到*生長培養(yǎng)基中。下面是深低溫保藏細胞的建議解凍步
驟:
直接接種法
1.從凍存管中取出細胞,用37℃水浴快速解凍。
2.將細胞直接接種到*生長培養(yǎng)基中。每毫升凍存細胞需要
10-20ml*生長培養(yǎng)基。計算活細胞的個數(shù)。細胞接種量至
少要達到3X105 活細胞/ml。
3.將細胞培養(yǎng)12-24h。更換新鮮*生長培養(yǎng)基以去除抗凍劑。
離心法
1.從凍存管中取出細胞,用37℃水浴快速解凍。
2.將1-2ml 凍存細胞接種到大約25ml*生長培養(yǎng)基中。要非常
輕柔地進行混合。
3.用大約80 X g的速度離心2-3分鐘。
4.吸除上清液。
5.用*生長培養(yǎng)基輕輕重懸解離下來的細胞,并計算活細胞的
個數(shù)。
6.接種細胞。細胞接種量至少要達到3X105 活細胞/ml。
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