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抗原修復技術在免疫組化中的應用

來源:上海北諾生物科技有限公司   2013年04月15日 11:09  

福爾馬林固定時,組織中的許多氨基酸殘基在分子內或分子間形成了醛鍵,使得不少抗原決定簇被封閉。同時,由于甲醛的聚合作用,使蛋白質分子間相互交聯形成大分子網絡,也導致了抗原決定簇被掩蓋,這就使得相當部分的抗原不能與抗體很好是進行反應。因此,抗原修復也是影響免疫組化染色結果的基本因素。

     微波(MW)加熱過程如下:在盒內放入200ml檸檬酸緩沖液(PH6.0±0.1),并蓋上帶有小孔的蓋子,微波加熱至沸騰;將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫塑料切片架中,放入已沸騰緩沖液中,有作者提供做免疫組化時采用微波爐中等功率800W[3],微波爐選用解凍檔的國產家用微波爐(根據目前的研究,建議用醫用微波爐),中檔繼續處理10-20分鐘;取出微波塑料缸冷卻至室溫,從緩沖液中取出玻片,片子經蒸餾水沖洗二次,之后用PBS(PH7.2-7.4)沖洗兩次,每次3分鐘。
盡管有少數作者[4]認為經高溫后冷卻這一步省略。在我們觀點,15分鐘的冷卻必須的幾點理由:1、如這一步省略,對于有些抗體而言,會降低AR-IHC染色強度。2、突然從高溫到低溫可導致組織片掉片。3、可能引起形態學的變化。
 
     總之,以高壓加熱方法、微波加熱方法較為穩定, 高壓加熱方法效果優于微波加熱方法和單純加熱方法。溶液的濃度對修復效果無任何影響,而PH值則影響較大。緩沖液以檸檬酸緩沖液和Tris-HCL較常用。前人的研究表明,溫度高修復時間短[6]。解放軍第251醫院根據臨床病理診斷、鑒別診斷和研究的實際需要,在抗原修復方法規范研究和應用的基礎上,創用了胰蛋白酶—尿素聯合消化技術、鹽酸水解暴露抗原技術和MW—表面活性劑Triton X—100(MW—TX)修復抗原技術 [7] 。抗原暴露或抗原修復方法較多,其中發MW—枸櫞酸緩沖液使用較多,效果。MW修復抗原的方法是石蠟切片脫蠟、水洗后放入修復液中,用250W的輸出功率2X5min,待冷卻至室溫按常規處理。目前AR過程已成功應用在BioTek全自動免疫組化染色儀中。

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