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IgM捕捉ELISA法

來源:上海索寶生物科技有限公司   2009年12月30日 09:26  

 

IgM捕捉ELISA法(MacELISA)檢測出血熱IgM抗體
本試劑盒系采用抗人μ鏈捕獲人血清IgM抗體,加辣根過氧化物酶-病毒抗原標記物,用以檢測出血熱特異性IgM抗體。具有較高的敏感性、特異性和重復性。特別適用于出血熱的早期特異性診斷及其它實驗性研究。本試劑盒為96人份/包裝。
試驗材料:
(1)抗人IgM抗體(μ鏈):用pH9.5的包被液包被酶標板
(2)凍干陽性血清/凍干陰性血清1支, 0.2ml/支,工作濃度為1:10;
(3)凍干辣根過氧化物酶-病毒抗原標記物1支, 0.5ml/支,工作濃度為1:20;
(4)凍干小牛血清1支,1ml/支;
(5)濃縮洗液(10倍濃縮)1瓶,50ml;(標本稀釋液為含5%小牛血清原倍洗液);
(6)A/B顯色液和終止液各1瓶。
(凍干試劑先用相應量的去離子水溶解,然后臨用前根據所需按工作濃度稀釋使用,余下的放-20℃保存)
(7)終止液:4N H2SO4
(8)酶標儀。
檢測步驟
(1)將待檢血清用稀釋液100倍稀釋,加入已包被抗人μ鏈抗體的酶標板一孔中,100μl/孔,同時加入已1:10稀釋的陽性血清/陰性血清對照各一孔,100μl/孔,置37℃水浴孵育1小時。
(2)棄去血清,用PBS-T漂洗5遍,甩干。
(3)將凍干辣根過氧化物酶-病毒抗原標記物1:10稀釋后,加入反應板相應孔內,100μl/孔,37℃水浴孵育1小時。
(4)棄去酶標抗體,用洗滌液洗滌6次,甩干。
(5)加顯色液:于各反應孔內加A/B液各一滴,37℃,避光3~5分鐘。
(6)加終止液(4NH2SO4)于每反應孔,一滴/孔。
結果判斷:
(1)目測方法:
陽性對照孔呈明顯藍色,陰性對照孔呈無色,對照成立;若待檢血清孔呈明顯淡藍色或深藍色(TMB),則標本為出血熱IgM抗體陽性,反之陰性。
(2)酶聯免疫檢測儀檢測:
于450nm(TMB)陽性對照孔OD值/陰性對照孔OD值,即P/N≥2.1,對照成立;若待檢血清孔OD值與陰性對照孔OD比值≥2.1,則標本為流行性出血熱IgM抗體陽性,反之陰性。
(陰性對照孔OD值小于0.05按0.05記,若大于0.05按實際數值計算)
意義:

陽性結果,表明患者新近漢坦病毒感染,用于出血熱早期診斷。

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