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IgM捕捉ELISA法

來源：上海索寶生物科技有限公司 2009年12月30日 09:26

IgM捕捉ELISA法（MacELISA）檢測出血熱IgM抗體

本試劑盒系采用抗人μ鏈捕獲人血清IgM抗體，加辣根過氧化物酶－病毒抗原標(biāo)記物，用以檢測出血熱特異性IgM抗體。具有較高的敏感性、特異性和重復(fù)性。特別適用于出血熱的早期特異性診斷及其它實驗性研究。本試劑盒為96人份/包裝。

試驗材料：

（1）抗人IgM抗體（μ鏈）：用pH9.5的包被液包被酶標(biāo)板

（2）凍干陽性血清/凍干陰性血清1支， 0.2ml/支，工作濃度為1：10；

（3）凍干辣根過氧化物酶－病毒抗原標(biāo)記物1支， 0.5ml/支，工作濃度為1：20；

（4）凍干小牛血清1支，1ml/支；

（5）濃縮洗液（10倍濃縮）1瓶，50ml；（標(biāo)本稀釋液為含5%小牛血清原倍洗液）；

（6）A/B顯色液和終止液各1瓶。

（凍干試劑先用相應(yīng)量的去離子水溶解，然后臨用前根據(jù)所需按工作濃度稀釋使用，余下的放-20℃保存）

（7）終止液：4N H₂SO₄

（8）酶標(biāo)儀。

檢測步驟：

（1）將待檢血清用稀釋液100倍稀釋，加入已包被抗人μ鏈抗體的酶標(biāo)板一孔中，100μl/孔，同時加入已1：10稀釋的陽性血清/陰性血清對照各一孔，100μl/孔，置37℃水浴孵育1小時。

（2）棄去血清，用PBS－T漂洗5遍，甩干。

（3）將凍干辣根過氧化物酶－病毒抗原標(biāo)記物1：10稀釋后，加入反應(yīng)板相應(yīng)孔內(nèi)，100μl/孔，37℃水浴孵育1小時。

（4）棄去酶標(biāo)抗體，用洗滌液洗滌6次，甩干。

（5）加顯色液:于各反應(yīng)孔內(nèi)加A/B液各一滴，37℃，避光3～5分鐘。

（6）加終止液（4NH2SO4）于每反應(yīng)孔，一滴/孔。

結(jié)果判斷：

（1）目測方法：

陽性對照孔呈明顯藍色，陰性對照孔呈無色，對照成立；若待檢血清孔呈明顯淡藍色或深藍色（TMB），則標(biāo)本為出血熱IgM抗體陽性，反之陰性。

（2）酶聯(lián)免疫檢測儀檢測：

于450nm（TMB）陽性對照孔OD值/陰性對照孔OD值,即P/N≥2.1，對照成立；若待檢血清孔OD值與陰性對照孔OD比值≥2.1，則標(biāo)本為流行性出血熱IgM抗體陽性，反之陰性。

（陰性對照孔OD值小于0.05按0.05記，若大于0.05按實際數(shù)值計算）

意義：

陽性結(jié)果，表明患者新近漢坦病毒感染，用于出血熱早期診斷。

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