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突破性的蛋白A定量系統

來源:上海滬峰生物科技有限公司   2013年01月08日 11:04  

突破性的蛋白A定量系統

海滬峰是中國大、品種zui齊全的食品安全檢測試劑盒和動物疫病診斷試劑盒的生產廠家,產品技術水平達到國內*、世界水平,并在世界上開發出呋喃西林代謝物檢測試劑盒、呋喃妥因代謝物快速檢測試劑盒等35種食品安全檢測試劑盒,20種動物疫病診斷試劑盒以及8種膠體金快速檢測卡,公司為了適應市場發展的需要,正在進行上百種試劑盒的研發,不久即將上市銷售。

工藝雜質的去除是生物制藥產品生產過程中的關鍵一步,且監管指引要求鑒定出純化過程中各個階段的雜質。在商業化重組單克隆抗體生物藥品的純化過程中,含有固定化葡萄球菌蛋白A(天然蛋白A)、重組蛋白A(rPA)或蛋白A亞基(MabSelect SuRe™)的純化樹脂被廣泛使用。必須對濾出的蛋白A進行靈敏分析,以確保此污染物不以不可接受的水平存在于終產品中。

目前定量蛋白A的方法(如ELISA)受到種種限制,如動態范圍窄、靈敏度低和流程費時費力。通常需要對每個樣品進行多次稀釋或開展重復分析,才能獲得落在標準曲線線性范圍內的結果。
ProteinSEQ™ 蛋白A定量系統

Life Technologies的ProteinSEQ™ 蛋白A定量系統是一個突破性的免疫分析平臺,它將基于TaqMan® Assay的qPCR分析的靈敏度和動態范圍帶到以抗體為基礎的蛋白分析物檢測中。系統借助鄰位連接分析(proximity ligation assay,簡稱PLA)技術來定量某一目標蛋白。
為了實現zui寬的動態范圍、zui高的靈敏度和重復性,他們開發出一種自動化、基于磁珠的固相PLA平臺,適用于MagMAX™ Express-96磁珠處理器。簡單的流程僅包含三步(圖1)。*步,制備待測樣品和標準品。樣品制備包含簡單的加熱/冷卻/離心過程,讓與蛋白A分析物結合的IgG變性和分離。下一步,設置平板,而目標蛋白的捕獲和探針連接都在MagMAX™ Express-96儀器上自動完成。簡單來說,與鏈霉親和素包被磁珠偶聯的生物素化的蛋白A抗體可用于捕獲蛋白A。洗滌之后,鄰位探針(結合有寡核苷酸的蛋白A抗體)與蛋白A目標結合。一旦與目標蛋白結合,探針相互靠近,在與鄰位探針雜交的夾板寡核苷酸(splint oligo)存在時由連接酶連接。zui后一步,通過qPCR擴增連接產物,并根據標準曲線確定目標蛋白的量。

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