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突破性的蛋白A定量系統(tǒng)

來源:上海滬峰生物科技有限公司   2013年01月08日 11:04  

突破性的蛋白A定量系統(tǒng)

海滬峰是中國大、品種zui齊全的食品安全檢測試劑盒和動物疫病診斷試劑盒的生產(chǎn)廠家,產(chǎn)品技術(shù)水平達到國內(nèi)*、世界水平,并在世界上開發(fā)出呋喃西林代謝物檢測試劑盒、呋喃妥因代謝物快速檢測試劑盒等35種食品安全檢測試劑盒,20種動物疫病診斷試劑盒以及8種膠體金快速檢測卡,公司為了適應(yīng)市場發(fā)展的需要,正在進行上百種試劑盒的研發(fā),不久即將上市銷售。

工藝雜質(zhì)的去除是生物制藥產(chǎn)品生產(chǎn)過程中的關(guān)鍵一步,且監(jiān)管指引要求鑒定出純化過程中各個階段的雜質(zhì)。在商業(yè)化重組單克隆抗體生物藥品的純化過程中,含有固定化葡萄球菌蛋白A(天然蛋白A)、重組蛋白A(rPA)或蛋白A亞基(MabSelect SuRe™)的純化樹脂被廣泛使用。必須對濾出的蛋白A進行靈敏分析,以確保此污染物不以不可接受的水平存在于終產(chǎn)品中。

目前定量蛋白A的方法(如ELISA)受到種種限制,如動態(tài)范圍窄、靈敏度低和流程費時費力。通常需要對每個樣品進行多次稀釋或開展重復分析,才能獲得落在標準曲線線性范圍內(nèi)的結(jié)果。
ProteinSEQ™ 蛋白A定量系統(tǒng)

Life Technologies的ProteinSEQ™ 蛋白A定量系統(tǒng)是一個突破性的免疫分析平臺,它將基于TaqMan® Assay的qPCR分析的靈敏度和動態(tài)范圍帶到以抗體為基礎(chǔ)的蛋白分析物檢測中。系統(tǒng)借助鄰位連接分析(proximity ligation assay,簡稱PLA)技術(shù)來定量某一目標蛋白。
為了實現(xiàn)zui寬的動態(tài)范圍、zui高的靈敏度和重復性,他們開發(fā)出一種自動化、基于磁珠的固相PLA平臺,適用于MagMAX™ Express-96磁珠處理器。簡單的流程僅包含三步(圖1)。*步,制備待測樣品和標準品。樣品制備包含簡單的加熱/冷卻/離心過程,讓與蛋白A分析物結(jié)合的IgG變性和分離。下一步,設(shè)置平板,而目標蛋白的捕獲和探針連接都在MagMAX™ Express-96儀器上自動完成。簡單來說,與鏈霉親和素包被磁珠偶聯(lián)的生物素化的蛋白A抗體可用于捕獲蛋白A。洗滌之后,鄰位探針(結(jié)合有寡核苷酸的蛋白A抗體)與蛋白A目標結(jié)合。一旦與目標蛋白結(jié)合,探針相互靠近,在與鄰位探針雜交的夾板寡核苷酸(splint oligo)存在時由連接酶連接。zui后一步,通過qPCR擴增連接產(chǎn)物,并根據(jù)標準曲線確定目標蛋白的量。

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