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慧德易教您如何解決色譜柱使用過程出現(xiàn)的問題

來源:北京慧德易科技有限責任公司   2012年12月18日 10:25  
  如何解決色譜柱使用過程出現(xiàn)的問題
  
  問題:
  
  不同色譜柱間差異
  
  使用期間柱變化
  
  原因:
  
  填料、鍵合相不同
  
  柱床破壞
  
  鍵合相丟失
  
  硅膠基質溶解
  
  強保留組分堆積堵塞
  
  表現(xiàn):
  
  保留因子(k),分離因子(α)
  
  柱效(N)
  
  保留因子(k),分離因子(α)
  
  柱效(N)
  
  保留因子(k),柱效(N)
  
  問題:
  
  柱外效應
  
  原因:
  
  系統(tǒng)差異、進樣量大、進樣閥與色譜柱之間、色譜柱與檢測器之間的管路太長、檢測器流通池體積大、接頭死體積大等。
  
  表現(xiàn):
  
  柱效(N)
  
  問題:
  
  分離效果變差
  
  原因:
  
  流動相組分改變
  
  流速改變
  
  溫度改變
  
  表現(xiàn):
  
  保留因子(k),柱效變化很小
  
  保留因子(k),分離因子(α)
  
  保留因子(k),柱效變化很小
  
  問題:
  
  柱平衡慢
  
  原因:
  
  重新平衡時間不夠
  
  柱超載樣品量太大
  
  表現(xiàn):
  
  保留因子(k),柱效變化很小
  
  保留因子(k),柱效(N)
  
  造成色譜峰(不對稱)拖尾的原因
  
  1.色譜柱本身填裝問題,篩板堵塞或填料塌陷;
  
  2.柱頭有污染;
  
  3.樣品超載;
  
  4.樣品溶劑不合適;
  
  5.柱外效應;
  
  6.化學或二次保留(硅羥基)效應;
  
  7.緩沖容量不足或不合適;
  
  8.重金屬污染。
  
  如何解決峰形拖尾的問題
  
  A.與化學有關的拖尾問題
  
  1.流動相中,加入30mM的三乙胺(用于堿性化合物)或醋酸胺(用于酸性化合物),未知化合物加醋酸三乙胺;
  
  2.如仍然拖尾,將三乙胺換為二甲基辛胺(或醋酸二甲基辛胺);
  
  3.降低進樣量至<1μg。
  
  B.與色譜柱有關的拖尾問題
  
  1.如柱頭處有強保留的樣品組分積聚,反相柱可用20倍柱體積的96%的二氯甲烷與4%甲醇,加1%氫氧化銨混合液沖洗;正向柱可用甲醇沖洗;
  
  2.使用保護柱。
  
  C.與HPLC系統(tǒng)有關的峰拖尾和峰加寬
  
  1.進樣體積過大,(通常≤25μL);
  
  2.進樣閥與色譜柱及檢測器之間的管路體積過大(*連接管應<20cm,內徑為0.007");
  
  3.檢測器流通池的體積過大。
  
  慧德易公司*代理DEVELOSIL、Chisso公司的色譜柱及色譜耗材產品;
  
  一級代理TOSOH(東曹)、YMC、Shodex(昭和)、陶氏等色譜柱及色譜耗材產品;
  
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