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大鼠血管緊張素Ⅰ受體1抗體(ATⅠR1)elisa試劑盒說明書

來源:上海滬峰生物科技有限公司   2012年11月07日 10:40  

                   大鼠血管緊張素Ⅰ受體1抗體(ATⅠR1)elisa試劑盒說明書
公司以服務生物技術科研事業的發展為己任,是一家專業從事生物試劑方面銷售和技術服務的國內合資公司。產品范圍涉及細胞生物學,分子生物學,免疫學及生物化學等實驗室科學研究試劑,包括細胞系,細胞培養,ELISA和免疫組化抗體,一抗,二抗,單克隆和多克隆抗體,PCR及放免試劑盒,生化試劑以及各類實驗耗材和儀器設備。

使用目的:
本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中血管緊張素Ⅰ受體1抗體(ATⅠR1)含量。
elisa試劑盒實驗原理
本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中大鼠血管緊張素Ⅰ受體1抗體(ATⅠR1)水平。用純化的大鼠血管緊張素Ⅰ受體1(ATⅠR1)抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被單抗的微孔中依次加入大鼠血管緊張素Ⅰ受體1抗體(ATⅠR1),再與HRP標記的大鼠血管緊張素Ⅰ受體1(ATⅠR1)抗原結合,形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠血管緊張素Ⅰ受體1抗體(ATⅠR1)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠血管緊張素Ⅰ受體1抗體(ATⅠR1)濃度。
試劑盒組成
1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶
2 酶標試劑 6ml×1瓶 8 標準品(4000pg/ml) 0.5ml×1瓶
3 酶標包被板 12孔×8條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份
5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個
標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
2000pg/ml 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
1000pg/ml 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
500pg/ml 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
250pg/ml 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
125pg/ml 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

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