在BEL-7402人肝癌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)操作中，除了常規(guī)的無(wú)菌操作和細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)范外，還需特別注意以下幾點(diǎn)：

首先，細(xì)胞傳代時(shí)的消化時(shí)間需嚴(yán)格控制。該細(xì)胞系對(duì)胰酶較為敏感，過(guò)度消化會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞膜損傷，影響后續(xù)貼壁和增殖。建議在顯微鏡下觀察細(xì)胞回縮變圓后立即終止消化，輕柔吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。若出現(xiàn)聚團(tuán)現(xiàn)象，可采用400目細(xì)胞篩過(guò)濾以獲得單細(xì)胞懸液。

    其次，凍存復(fù)蘇環(huán)節(jié)要格外謹(jǐn)慎。凍存液中的DMSO濃度建議控制在8%-10%，程序降溫盒必須預(yù)冷至4℃后再放入-80℃冰箱。復(fù)蘇時(shí)需快速水浴震蕩至最后一塊冰晶融化，立即加入預(yù)溫的培養(yǎng)基進(jìn)行梯度稀釋，以降低DMSO的滲透壓沖擊。值得注意的是，該細(xì)胞系復(fù)蘇后通常需要48小時(shí)才能恢復(fù)增殖活性，不宜在24小時(shí)內(nèi)進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

    對(duì)于藥物敏感性實(shí)驗(yàn)，要特別注意細(xì)胞接種密度的優(yōu)化。預(yù)實(shí)驗(yàn)表明，BEL-7402在96孔板中的最適接種密度為5×103~8×103 cells/well，密度過(guò)高會(huì)導(dǎo)致對(duì)照組提前進(jìn)入平臺(tái)期。建議在加藥前用無(wú)酚紅培養(yǎng)基置換原培養(yǎng)基，避免藥物與酚紅發(fā)生相互作用干擾檢測(cè)結(jié)果。MTT法測(cè)定時(shí)，甲臜結(jié)晶溶解后需在1小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)，該細(xì)胞系產(chǎn)生的甲臜結(jié)晶在常規(guī)DMSO溶解后呈現(xiàn)特征性的紫紅色，若出現(xiàn)異常顏色變化應(yīng)重新實(shí)驗(yàn)。