致病微生物檢測方法多樣,包括傳統檢測方式與現代快速檢測技術,具體如下:
一、傳統檢測方式
涂片鏡檢
原理:將樣本(如血、痰、尿液、糞便等)染色后置于顯微鏡下觀察,通過形態、排列等特征初步判斷病原體類型。
特點:簡便快速,適用于特殊形態病原體(如結核分枝桿菌、螺旋體)的早期診斷,但無法區分死菌與活菌,且對操作人員經驗要求較高。
應用:基層實驗室常用方法,如淋球菌感染、結核病的初步篩查。
分離培養與生化反應
原理:將樣本接種于適宜培養基,通過菌落形態、生化試驗(如吲哚試驗、VP試驗)鑒定微生物種類。
特點:檢測價值高,但耗時較長(需數天至數周),且部分微生物難以培養(如病毒、支原體)。
應用:痰液、糞便、血液等樣本中細菌的分離與鑒定,如肺炎克雷伯菌的藥敏試驗。
組織細胞培養
原理:將病原微生物接種于活細胞或敏感動物體內,觀察細胞病變或動物組織器官變化。
特點:適用于病毒、立克次體等難以培養的微生物,但操作復雜、周期長。
應用:病毒分離(如流感病毒)、衣原體檢測。
二、現代快速檢測技術
聚合酶鏈反應(PCR)
原理:通過特異性引物擴增微生物DNA片段,實現快速、靈敏檢測。
特點:
高靈敏度:可檢測極微量核酸(如單個細菌基因組)。
高特異性:引物設計針對保守基因區域,減少假陽性。
快速:數小時內完成檢測,適用于早期診斷。
應用:
性傳播疾病:如淋球菌、沙眼衣原體檢測。
腸道感染:如諾如病毒、輪狀病毒檢測。
呼吸道感染:如新冠病毒、流感病毒檢測。
基因芯片技術
原理:將高密度DNA探針固定于固相表面,通過雜交反應同時檢測多種微生物。
特點:
高通量:單次檢測可覆蓋數百種病原體。
快速:4小時內完成菌種判斷。
耐藥性分析:可檢測耐藥基因(如MRSA的mecA基因)。
應用:食物中毒病原菌篩查、醫院感染暴發調查。
核酸雜交技術
原理:利用標記探針與病原微生物核酸特異性結合,通過信號檢測實現鑒定。
類型:
核酸原位雜交:直接檢測病原體細胞中的核酸。
膜上印跡雜交:將病原體核酸純化后與探針雜交。
特點:操作簡便、快速,適用于敏感、特異的病原微生物檢測。
應用:結核分枝桿菌、HPV病毒檢測。
免疫學檢測
原理:利用抗原-抗體特異性結合反應檢測病原微生物。
方法:
酶聯免疫吸附測定(ELISA):通過酶標記抗體檢測樣本中抗原或抗體。
免疫熒光技術:用熒光標記抗體直接觀察病原體。
免疫磁珠分離技術:利用磁珠微球分離特定病原體,縮短檢測時間(如白色念珠菌檢測可縮短4小時)。
特點:快速、靈敏,適用于低濃度或難培養微生物檢測。
應用:HIV抗體檢測、乙肝表面抗原檢測。
二代測序技術(NGS)
原理:通過宏基因組測序全面分析樣本中所有微生物種類。
特點:
無偏性檢測:無需預設目標,可發現未知病原體。
高分辨率:準確鑒定到種或亞型水平。
應用:復雜感染(如中樞神經系統感染)、新發傳染病(如新冠病毒)的病原鑒定。
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