唐菖蒲伯克霍爾德氏菌是Burkholderia屬的微生物，原產地為中國。菌落淺黃色，圓形，表面光滑、濕潤、稍凸起，邊緣整齊。菌體呈短桿狀，單個或成對排列，革蘭氏陰性。主要用途為研究。

一、菌種簡介

平臺編號：Bio-132196

規格：凍干物

拉丁屬名：Burkholderia Gladioli

中文名稱：唐菖蒲伯克霍爾德氏菌

拉丁名稱：Burkholderia gladioli

模式菌株：否

其它保藏中心編號：=CMCC（B）10802

來源歷史：←中國食品藥品檢定研究院

收藏時間：2021/8/5

特征特性：菌體短桿，單個或成對排列，革蘭氏陰性。

參考用途：GB 4789.28培養基質控用標準菌株。

生物危害程度：三類

致病對象：無

分離基物：食品

培養基編號：CM0002

培養基名稱：營養肉汁瓊脂

培養基成分：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，瓊脂 15.0g，蒸餾水 1.0L，pH7.0。[注] 培養芽孢桿菌時加入5mg MnSO4·H2O，則有利于產生芽孢。推薦使用商品化成品培養基。

培養溫度：36 ~36 ℃

培養時間：24-48 小時

需氧類型：好氧

用途：GB 4789.28培養基質控用標準菌株。

注意事項：僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產品信息以出庫為準）

二、培養基

*營養瓊脂培養基（NA）

*LB 培養基（以上培養基選一即可）

三、保藏條件

安瓿瓶凍干菌種和培養物應在 2-8°C 保存。西林瓶菌種請置于-20℃冷凍。甘油保藏溫度為-80°C;請勿長期置于室溫。

四、保存方法

1、傳代保存法：培養基的濃度不宜過高,營養成分不宜過于豐富,尤其是碳水化合物的濃度應在可能的范圍內盡量降低。培養溫度通常以稍低于生長溫度為好。若為產酸菌種,則應在培養基中添加少量碳酸鈣。

2、液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時間更長,適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細菌等的保存。

3、懸液保存法：

①蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌,將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數年。本法應注意避免水分的蒸發。

②糖液保存法：適用于酵母菌,如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗處保存,可長達10年。除此之外,也可使用緩沖液或食鹽水等進行保存。

4、載體保存法：①土壤保存法;②砂土保存法;③硅膠保存法;④磁珠保存法;⑤麩皮保存法;⑥紙片(濾紙)保存法。

5、常用的冷凍保存法：

①低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時使用螺旋口試管較為方便,也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時菌液加量不宜過多,有些可添加保護劑。此外,也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器內,再放入低溫冰箱內進行保存的。

②干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內,再置于冰箱內進行冷凍保存。

③液氮保存法(-196℃)：是適用范圍的微生物保存法。

五、微生物培養方法

1、平板劃線分離法:把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細胞用接種環圈在平板培養基表面,通過分區劃線稀釋而得到較多獨立分布的單個細胞,經培養后生長繁殖成單菌落。

2、稀釋涂布平板法將菌液進行一系列的梯度稀釋,然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養基的表面進行培養,在稀釋度足夠高的菌液里,聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞,從而能在培養基表面形成單個菌落。

上述兩種方法雖然都可以實現觀察菌落特征的目的,但平板劃線分離法不能對菌落計數,而稀釋涂布平板法培養過程復雜,對平板的要求比較高,可參照以下步驟:

a、制備平板培養基將氯化鈉蔗糖瓊脂培養基加熱溶化并冷卻至65℃,向氯化鈉蔗糖瓊脂培養基中加入克林霉素溶液3~5ml并混合均勻,然后取20ml混合均勻的培養基溶液倒入培養皿,輕輕搖動培養皿,使培養基溶液均勻分布在培養皿底部,待培養基溶液凝固后即得平板培養基。

b、制備活性污泥混合液稱取活性污泥土樣15g,放入盛100ml無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中,振搖15~20min混合均勻,用一支1ml無菌吸管從中吸取1ml土壤懸液加入盛有9ml無菌水的大試管中充分混勻,制成活性污泥混合液。

c、培養基涂布從活性污泥混合液中吸取0.2ml,滴在平板培養基表面的位置,用無菌玻璃涂棒將活性污泥混合液沿同心圓方向輕輕地向外擴展,使之分布均勻。

六、注意事項

1）凍干活化，干粉要全部用完，不能預留，用無菌吸管吸取 0.3ml-0.5ml 的培養液（即以上建議的培養基配方，不加瓊脂）或者無菌水，滴入凍干管中，輕輕振蕩至其溶解。吸取全部菌懸液，接種在培養基上（建議不超過 2 支平板或者斜面，若接種液體培養基，則試管液體不超過 5ml 為宜）；

2）經過冷凍干燥保藏，菌種處于休眠狀態，復蘇培養時可能會延遲生長，這時需較長的培養時間； 若您收到的是已復蘇的培養物（非凍干菌），則可以直接用于您的實驗，或根據需要轉接培養如有不明白之處，請務必先咨詢我單位技術人員，避免不必要的損失；

3）微生物菌種應保藏于低溫、清潔干燥的地方，室溫放置時間過長會導致菌種衰退；

4）菌種操作應在無菌條件下進行；轉種完畢，應經滅菌再做丟棄處理；

5）應根據菌種狀況及時轉接，凍干菌種保藏時間通常為 2-25 年；

6）菌種使用過程中如出現雜菌污染或菌種生產性能下降，應及時和微生物菌種查詢網聯系。

7）如若有菌種復蘇不活或者污染等情況，請在收到菌鐘后 2 個月內聯系，逾期不予受理；

8）打管操作需由專業微生物技術人員在相應的防護設備中進行，生物危害程度為三類的菌種應在生物安全柜中操作，打管時凍干管應遠離面部，保護眼睛。

9）安瓿瓶開封：用浸過 75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量（2-3滴）無菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端并將凍干管開口處在火焰上過一遍，并保持在火焰旁操作。

10）甘油管使用：使用本甘油菌時可以不用融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或進行液體培養即可。也可以融解后使用，但隨著凍融次數的增加，細菌的活力會逐漸下降。

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