ELISA(酶聯免疫吸附測定)是一種廣泛應用于生物學、醫學和農業等領域中的免疫分析技術。它通過抗原或抗體與固相載體的結合,以及酶標記物的催化反應,實現對特定分子的檢測和定量。
基本原理:
ELISA利用抗原或抗體的特異性結合,將它們固定在固相載體上(如96孔板),然后通過酶標記的抗體與底物反應產生可檢測信號。這種方法可以實現對微量物質的高靈敏度和高特異性檢測。
ELISA(酶聯免疫吸附測定)實驗中,三個關鍵的必要試劑:
1. 包被抗體/抗原:這是試劑盒的“靈魂”所在。它們預先被固定在96孔板內壁上,用作捕獲目標抗原或抗體的錨點。這些抗原或抗體能夠特異性地結合樣品中的目標分子。
2. 酶標記抗體:這個試劑是實現高靈敏度檢測的關鍵。它結合了高度特異性的抗體與具有催化活性的酶,如辣根過氧化物酶(HRP)。當酶標記抗體與孔板上的抗原或抗體結合后,酶會催化底物發生化學反應,產生顯色產物,從而實現信號放大和檢測。
3. 底物溶液:底物是酶的反應物,本身無色,但在酶的作用下會發生化學變化,生成有色產物。這個顯色反應的深度與樣品中目標分子的濃度成正比,因此通過測量顯色的深淺,可以定量分析目標分子的含量。常用的底物包括TMB(四甲基聯苯胺)和ABTS(2,2'聯氮雙(3乙基苯并噻唑啉6磺酸)),它們在催化后會形成藍色或橙黃色產物。
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