苯丙氨酸解氨酶（PAL）檢測試劑盒（苯丙氨酸比色法）

產品貨號：BA1566

產品規(guī)格：50T

產品簡介：

苯丙氨酸解氨酶( L－phenylalanine ammonia-lyase，PAL)是催化直接脫掉L-苯丙氨酸上的氨而生成反式桂皮酸的酶，該酶多存在于高等植物、酵母、菌類可溶性部分物質，是1961年J.Koukol在大麥中發(fā)現的，推測其分子量約為30萬，這是一個可把苯丙氨酸用于酚類化合物合成的酶。在組織中的活性可隨外界因素而發(fā)生顯著變化，用光照、病傷害、植物激素處理等會使活性顯著增加，在多數情況下在組織中活性增加時，酶發(fā)生失活作用，這

時組織中具有活性酶的量很快就會減少，據認為這種失活是與類蛋白質物質作用有關，測定細胞木質素合成途徑中間代謝物及關鍵酶活性，可以探討多種生物細胞發(fā)育過程中木質素沉積的代謝機理，為減少水果石細胞含量提高其品質提供依據。

尚寶苯丙氨酸解氨酶(PAL)檢測試劑盒(苯丙氨酸比色法)測原理是以苯丙氨酸作為底物，在酶促反應的件下采用每隔一定時間測定產物生成量的方法，于分光光度計290nm處檢測吸光度，以吸光度變化所需酶量進行計算，該試劑盒主要用于植物組織的裂解液或勻漿液、血清等樣品中內源性的苯丙氨酸解氨酶活性，尤其適用于檢測水果中苯丙氨酸解氨酶活性。該試劑盒僅用于科研領域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產品組成

自備材料：

1. 蒸餾水

2. 研缽或勻漿器

3. 離心管或試管

4. 低溫離心機

5. 水浴鍋或恒溫箱

6. 比色杯

7. 分光光度計

操作步驟 (僅供參考) ：

1. 準備樣品：

①植物樣品：取2g植物組織或水果中層果肉，加入5ml PAL Lysis buffer，冰浴情況下充分搗碎研磨或勻漿，4℃ 10000g離心15~20min，留取上清液，-20℃凍存，用于苯丙氨酸解氨酶的檢測。

②血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測定，-20℃凍存，用于苯丙氨酸解氨酶的檢測。

③細胞或組織樣品：取恰當細胞或組織裂解液，如果有必要需進行適當勻漿，4℃ 10000g離心15~20min，取上清液，-20℃凍存，用于苯丙氨酸解氨酶的檢測。

④高活性樣品：如果樣品中含有較高活性的苯丙氨酸解氨酶，可以使用蒸餾水或PAL Lysis buffer稀釋進行恰當的稀釋。

2. PAL加樣：按照下表設置對照管、測定管，溶液應按照順序依次加入，并注意避免產生氣泡。如果樣品中的PAL活性過高，可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定，樣品的檢測能設置2平行管，求平均值。

3. PAL測定：以對照管為對照(調零)，比色杯光徑1.0cm，分光光度計立即測定290nm處測定管的吸光度(記為A_{測定 0} )。40℃準確孵育1h，立即加入0.1ml PAL終止液終止反應(備選方案)，以對照管為對照(調零)，分光光度計立即測定 290nm處測定管的吸光度(記為A_測定1 )。注意：加入PAL終止液終止反應不是必須步驟，可37℃準確孵育1h后直接以對照管為對照(調零)，比色杯光徑1.0cm，分光光度計立即測定290nm處測定管的吸光度(記為A_測定1 )。

計算：

PAL活性單位的定義：在該實驗條件下，每小時吸光度變化0.01所需酶量為一個活性單位。

組織樣品PAL(U)={(A_測定1 -A_測定0 )×V _T }/(W×V_S ×0.01×t)

式中：A_測定1 =40℃孵育1h后測定管的吸光度

A_測定0 =加入PAL Assay buffer后立即檢測的測定管吸光度

W=組織樣本的重量(g)

V_T =提取酶液的總體積(ml)

V_S =測定時所用酶液體積(ml)

t=反應時間(h)=1

液體樣品PAL(U)=(A_測定1-A_測定0 )/(0.01×t)

式中：A_測定1 =40℃孵育1h后測定管的吸光度

A_測定0 =加入PAL Assay buffer后立即檢測的測定管吸光度

t=反應時間(h)=1

注意事項 ：

1. 待測樣品中不能含有酶抑制劑，同時需避免反復凍融。

2. 獲得上清液為PAL酶液，應盡快檢測，亦可-20℃保存。

3. 如果沒有分光光度計，也可以使用普通的酶標儀測定，但應注意酶標儀的檢測體積。

4. 每次檢測指標不宜過多，否則操作時間不一，有可能導致樣本間的差異。

5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期：6個月有效。4℃運輸，4℃保存。