苯丙氨酸解氨酶(PAL)檢測試劑盒(苯丙氨酸比色法)
產品貨號:BA1566
產品規格:50T
產品簡介:
苯丙氨酸解氨酶( L-phenylalanine ammonia-lyase,PAL)是催化直接脫掉L-苯丙氨酸上的氨而生成反式桂皮酸的酶,該酶多存在于高等植物、酵母、菌類可溶性部分物質,是1961年J.Koukol在大麥中發現的,推測其分子量約為30萬,這是一個可把苯丙氨酸用于酚類化合物合成的酶。在組織中的活性可隨外界因素而發生顯著變化,用光照、病傷害、植物激素處理等會使活性顯著增加,在多數情況下在組織中活性增加時,酶發生失活作用,這
時組織中具有活性酶的量很快就會減少,據認為這種失活是與類蛋白質物質作用有關,測定細胞木質素合成途徑中間代謝物及關鍵酶活性,可以探討多種生物細胞發育過程中木質素沉積的代謝機理,為減少水果石細胞含量提高其品質提供依據。
尚寶苯丙氨酸解氨酶(PAL)檢測試劑盒(苯丙氨酸比色法)測原理是以苯丙氨酸作為底物,在酶促反應的件下采用每隔一定時間測定產物生成量的方法,于分光光度計290nm處檢測吸光度,以吸光度變化所需酶量進行計算,該試劑盒主要用于植物組織的裂解液或勻漿液、血清等樣品中內源性的苯丙氨酸解氨酶活性,尤其適用于檢測水果中苯丙氨酸解氨酶活性。該試劑盒僅用于科研領域,不宜用于臨床診斷或其他用途。
產品組成
試劑名稱 | 50T | 保存條件 |
試劑(A): PAL Lysis buffer | 250ml | 4℃,避光 |
試劑(B): PAL Assay buffer | 30ml | 4℃,避光 |
試劑(C): PAL終止液 | 5ml | 室溫 |
自備材料:
1. 蒸餾水
2. 研缽或勻漿器
3. 離心管或試管
4. 低溫離心機
5. 水浴鍋或恒溫箱
6. 比色杯
7. 分光光度計
操作步驟 (僅供參考) :
1. 準備樣品:
①植物樣品:取2g植物組織或水果中層果肉,加入5ml PAL Lysis buffer,冰浴情況下充分搗碎研磨或勻漿,4℃ 10000g離心15~20min,留取上清液,-20℃凍存,用于苯丙氨酸解氨酶的檢測。
②血漿、血清和尿液樣品:血漿、血清按照常規方法制備后可以直接用于本試劑盒的測定,-20℃凍存,用于苯丙氨酸解氨酶的檢測。
③細胞或組織樣品:取恰當細胞或組織裂解液,如果有必要需進行適當勻漿,4℃ 10000g離心15~20min,取上清液,-20℃凍存,用于苯丙氨酸解氨酶的檢測。
④高活性樣品:如果樣品中含有較高活性的苯丙氨酸解氨酶,可以使用蒸餾水或PAL Lysis buffer稀釋進行恰當的稀釋。
2. PAL加樣:按照下表設置對照管、測定管,溶液應按照順序依次加入,并注意避免產生氣泡。如果樣品中的PAL活性過高,可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定,樣品的檢測能設置2平行管,求平均值。
加入物(ml) | 對照管 | 測定管 |
蒸餾水 | 1.5 | 1.0 |
待測樣品 | 0.5 | 0.5 |
PAL Assay buffer | - | 0.5 |
3. PAL測定:以對照管為對照(調零),比色杯光徑1.0cm,分光光度計立即測定290nm處測定管的吸光度(記為A測定 0 )。40℃準確孵育1h,立即加入0.1ml PAL終止液終止反應(備選方案),以對照管為對照(調零),分光光度計立即測定 290nm處測定管的吸光度(記為A測定1 )。注意:加入PAL終止液終止反應不是必須步驟,可37℃準確孵育1h后直接以對照管為對照(調零),比色杯光徑1.0cm,分光光度計立即測定290nm處測定管的吸光度(記為A測定1 )。
計算:
PAL活性單位的定義:在該實驗條件下,每小時吸光度變化0.01所需酶量為一個活性單位。
組織樣品PAL(U)={(A測定1 -A測定0 )×V T }/(W×VS ×0.01×t)
式中:A測定1 =40℃孵育1h后測定管的吸光度
A測定0 =加入PAL Assay buffer后立即檢測的測定管吸光度
W=組織樣本的重量(g)
VT =提取酶液的總體積(ml)
VS =測定時所用酶液體積(ml)
t=反應時間(h)=1
液體樣品PAL(U)=(A測定1-A測定0 )/(0.01×t)
式中:A測定1 =40℃孵育1h后測定管的吸光度
A測定0 =加入PAL Assay buffer后立即檢測的測定管吸光度
t=反應時間(h)=1
注意事項 :
1. 待測樣品中不能含有酶抑制劑,同時需避免反復凍融。
2. 獲得上清液為PAL酶液,應盡快檢測,亦可-20℃保存。
3. 如果沒有分光光度計,也可以使用普通的酶標儀測定,但應注意酶標儀的檢測體積。
4. 每次檢測指標不宜過多,否則操作時間不一,有可能導致樣本間的差異。
5. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
有效期:6個月有效。4℃運輸,4℃保存。
免責聲明
- 凡本網注明“來源:化工儀器網”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品,未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的,應在授權范圍內使用,并注明“來源:化工儀器網”。違反上述聲明者,本網將追究其相關法律責任。
- 本網轉載并注明自其他來源(非化工儀器網)的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時,必須保留本網注明的作品第一來源,并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內容、版權等問題,請在作品發表之日起一周內與本網聯系,否則視為放棄相關權利。