?稱量：稱取5g（精確至0.01g）試樣于燒杯中，加標

?提?。?/strong>加入適量磷酸鹽緩沖液Ⅱ提取，分次將樣品轉移至 25mL 容量瓶，用磷酸鹽緩沖液Ⅱ 定容至刻度，充分混勻后轉入離心管，在4 ℃條件下 10000r/min 離心 8min，取樣液 10mL 待凈化；

?活化：肝素親和柱使用前先將柱中保護液放掉，后加入 5.0mL 磷酸鹽緩沖液Ⅱ活化；

?上樣：準確將 10.0mL樣液過柱，控制流速在 1mL/min~3mL/min；

?淋洗：用 10.0mL 磷酸鹽緩沖液Ⅱ淋洗，棄去流出液，用吸水紙擦拭干凈柱管內壁殘留液體；

?洗脫：5.0mL磷酸鹽緩沖液Ⅰ洗脫，不要抽干；

?濃縮：收集洗脫液并用磷酸鹽緩沖液Ⅰ定容至 5.00mL，過0.45μm PES水相針頭濾膜，上機待測。

?色譜柱：Jupiter C4 4.6×250mm 5µm 300?（00G-4167-E0）

?流動相：A：0.1%三氟乙-酸水溶液；B：乙腈；

?流 速：1.0 mL/min；

?柱 溫：30 ℃；

?進樣量：50 μL；

?梯度程序見下表：

牛乳鐵蛋白標準曲線

牛乳鐵蛋白加標回收實驗結果