表觀遺傳激活或失活在許多重要人類疾病中起著關鍵作用,尤其是在癌癥中。
表觀遺傳基因失活的主要機制是DNA甲基轉移酶引起的基因組DNA中CpG島的甲基化。組蛋白乙酰轉移酶(HATs)和去乙酰化酶(HDACs)通過染色質依賴的轉錄抑制或激活來控制或調節DNA甲基化。HATs將乙酰基團從乙酰輔酶A轉移到組蛋白的賴氨酸殘基上。P300是主要的HAT,它催化哺乳動物細胞中組蛋白H3在賴氨酸18(H3K18)上的乙酰化。HDACs和SIRT1/7是主要的組蛋白去乙酰化酶,它們能夠使H3K18去乙酰化。H3K18ac一直被視為轉錄活性基因的標志性標記,它僅存在于啟動子下游的5'區域。H3K18ac的水平也可以通過抑制或激活HATs或HDAC/SIRTs而改變。在血漿或血清中檢測到的循環H3K18ac已被證明是許多不同疾病或病理變化(如癌癥進展)的標志物。因此,檢測循環H3K18ac能夠為更好地理解基因激活和沉默的表觀遺傳調控、與組蛋白修飾相關的病理過程、疾病相關生物標志物的篩選以及開發針對組蛋白修飾的藥物提供有用信息。
EpiQuik™循環乙酰化組蛋白H3K18 ELISA試劑盒(比色法)是專為定量檢測血漿和血清中的循環組蛋白H3K18ac而設計的。
艾美捷EpiQuik循環乙酰組蛋白H3K18 ELISA試劑盒(比色法)(#P-3134-48)優勢與特點:
1、快速高效的實驗流程,可在2.5小時內完成。
2、高靈敏度和特異性。檢測限低至0.5 ng/孔,在血漿/血清中指示量范圍內的動態范圍為1-20 ng/孔。僅識別H3K18ac,與未修飾的H3或其他同一賴氨酸位點的修飾物無交叉反應。
3、方便地包含對照用于H3K18ac的定量。
4、條帶微孔板格式使實驗靈活:可手動或高通量操作。
5、簡單、可靠且一致的實驗條件。
基本信息:
質量控制:每一批次的EpiQuik™循環乙酰化組蛋白H3K18 ELISA試劑盒(比色法)均經過預設規格的測試,以確保產品質量的一致性。EpigenTek保證所有產品按照產品說明書中描述的方式發揮性能。
安全:在使用本產品時,需要穿戴合適的實驗服、一次性手套,并佩戴適當的眼部保護裝置。
產品更新:EpigenTek保留變更或修改任何產品的權利,以提升其性能和設計。本用戶指南中的信息可能會隨時更改,恕不另行通知。因此,在使用試劑盒時,請僅使用隨試劑盒提供的用戶指南。
使用限制:EpiQuik™循環乙酰化組蛋白H3K18 ELISA試劑盒(比色法)僅供研究使用,不適用于診斷或治療應用。
原理與操作流程:
EpiQuik™循環乙酰化組蛋白H3K18 ELISA試劑盒(比色法)是用于測量血漿或血清中總H3K18ac的。在使用該試劑盒的實驗中,血漿/血清樣本中乙酰化于K18的組蛋白H3蛋白被涂有抗H3K18ac抗體的條帶孔捕獲。捕獲的H3K18ac蛋白隨后可被檢測抗體識別,并通過比色顯色試劑進行顯色。H3K18ac的比例與吸光強度成正比。通過與標準對照比較,可以定量H3K18ac的絕對量。
圖:從HL-60細胞中使用EpiQuik™總組蛋白提取試劑盒(產品編號:OP0006)制備組蛋白提取物,并將其以不同濃度加入牛血漿中。隨后利用EpiQuik™循環乙酰化組蛋白H3K18 ELISA試劑盒(比色法)測定了H3K18ac的含量。
運輸與儲存:
該試劑盒分兩部分運輸:第一部分在常溫下運輸,第二部分在4℃的冷凍冰袋中運輸。收到試劑盒后:(1)將DAb和標準對照置于–20℃,避免光照;(2)將WB、HAB、DS、8孔檢測條和對照檢測條置于4℃,避免光照;(3)將剩余組分(SS和粘性覆蓋膜)置于室溫,避免光照。
當儲存條件合適時,試劑盒的所有組分自發貨之日起穩定期為6個月。
注意事項:(1)使用前檢查WB(10倍洗液)中是否含有鹽沉淀。如果有,請在室溫或37℃下加熱并搖晃緩沖液,直至鹽重新溶解;(2)檢查DS(顯色液)中是否呈現藍色,這表明溶液受到污染,不應使用。為了避免污染,在將DS加入檢測孔之前,先將所需的DS量轉移到一個次級容器(試管或小瓶)中。
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