一、背景
氣單胞菌屬為弧菌科(Vi-brio)中的一類革蘭氏陰性短桿菌。生存于江河或沿岸的海水中,是魚類的重要病原菌,亦可引起人畜的偶發性感染,致腸道疾病或食物中毒。菌體呈直桿狀,兩端鈍圓,(0.3~1.0)×(1.0~3.5)微米,單在或成雙。通常單極生鞭毛運動,固體培養基幼齡培養物可形成周生鞭毛(殺鮭氣單胞菌無鞭毛,不能運動),兼性厭氧,葡萄糖代謝呼吸型兼發酵型,分解碳水化合物產酸或產酸產氣 (CO2及H2),化能有機營養,利用糖和有機酸作為碳源。
還原硝酸鹽為亞硝酸鹽,氧化酶陽性,接觸酶陽性。普通培養基及麥康凱瓊脂生長良好??怪苹【鷦?/span>O/129(2,4二胺基-6,7二異丙基喋啶)。氧化酶陽性,多種糖和有機酸可用作碳源;利用葡萄糖可產酸(產氣或不產氣),但利用肌醇時則不產氣;多數不發酵乳糖??尚纬擅髂z酶、DNA酶、RNA酶和酯酶。硝酸鹽還原為陽性。
生長不需NaCl。營養要求不高,多數可在營養瓊脂或胰 胨大豆瓊脂上。G+Cmol%值為57~63。已知菌有23種,模式種為嗜水氣單胞菌(A.hydrophila)。氣單胞菌有廣泛的致病性,能感染魚類、禽類和哺乳類,導致皮膚潰瘍等局部感染或敗血癥。是水生動物尤其是魚類的常見致病菌,引起魚的癤點病、紅瘟病或紅口病,在水溫高時可暴發流行。也可感染人類,使之患腦膜炎、敗血癥和急性腸胃炎等。
氣單胞菌在水環境中普遍存在,僅其中具毒力因子的菌株才有致病性。毒力因子如毒素(HEC毒素或氣溶素類穿孔毒素)、蛋白酶、粘附素(S蛋白、菌毛、外膜蛋白等)和鐵載體等。
二、分類
該菌屬可分為兩個群:①嗜冷無動力群,代表種是殺鮭氣單胞菌(A. salmonicida),根據生化特征可分為殺鮭亞種(A.salmonicida subsp. salmonicida)、無色亞種(A.salmonicida subsp.achromogenes)及殺鱒亞種(A.salmonicida subsp.mosoucida)。殺鮭亞種產生水溶性棕色色素,不產生吲哚,區別于另兩個亞種。生長溫度22~25℃,37℃不生長,在普通培養基上生長良好,在血瓊脂平板上迅速溶血。
殺鮭氣單胞菌血清型一致。自然條件下為嚴格寄生菌,表面A蛋白為毒力因子,產生殺白細胞毒素,致鮭等淡水養殖魚腸炎、癤瘡病、敗血癥,金魚的“腐皮病”及鯉魚的“紅皮病”,對人畜無致病性。②嗜溫有動力群,包括嗜水氣單胞菌(A.hydrophila)和豚鼠氣單胞菌(A.caviae)。生長溫度為28℃,37℃亦可生長。
嗜水氣單胞菌廣泛存在于淡水及含有機物的水、淤泥及淡水魚類的體表,可致鰻“紅鰭病”、鯉魚“紅斑病”及金魚“堅鱗病”等魚類疾病,亦可致水貂出血性敗血癥,并為牛、豬、水貂胃腸炎的病原,引起人的急性腹瀉或創傷感染。致病因子有β溶血素和腸毒素。
三、鑒定
氣單胞菌鑒定到種比較困難,傳統的鑒定方法依生化反應在弧菌科內分為6 組,但生化反應多有重疊,難以明確劃分,鑒定的試驗方法也不一致。商品化的鑒定裝置能鑒定的菌種有限,其結果與傳統的方法不盡一致,但傳統的鑒定方法未能包括新的菌種。最近有研究收集了14 個菌種共193 株氣單胞菌,全面地觀察其生化反應(包括藥敏試驗在內的53 項試驗),分別記錄其典型的和非典型的表型特征,在此基礎上提出新的鑒別方案。
此鑒定方案應用Moeller′s 賴氨酸脫羧酶(ly sinedecarboxylase ,LDC )、鳥氨酸脫羧酶(o rni thinedecarboxylase ,ODC)和精氨酸雙水解酶(argininedihydrolase ,ADH)將氣單胞菌分為5 個表型組。
1組:只ODC 為陽性者:維氏氣單胞菌維氏生物型、異常嗜糖氣單胞菌。2 組:LDC 陽性,ADH 陽性(偶有陰性):嗜水氣單胞菌、維氏氣單胞菌溫和生物型、簡氏氣單胞菌、舒氏氣單胞菌、脆弱氣單胞菌、異常嗜糖氣單胞菌。3 組:LDC 、ODC 、ADH 均為陰性者:嗜水氣單胞菌、中間氣單胞菌、A .eucrenophilia 。4 組:只ADH 陽性者:豚鼠氣單胞菌、中間氣單胞菌、A .bestiarumA .eucrenophilia 、鰻氣單胞菌、波氏氣單胞菌。5 組:LDC 和ADH 可陽性或陰性者:殺鮭氣單胞菌、A .bestiarum 。
四、致病性
氣單胞菌屬(Aeromonas)到目前已擴展到包括嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophil)、豚鼠氣單胞菌(Aeromonas caviae)、 溫和氣單胞菌(Aeromonas sobria)、殺鮭氣單胞菌(Aeromonas salmonicida)、中間氣單胞菌(Aeromonas media)、維氏氣單胞菌(Aeromonas veronii)、簡氏氣單胞菌(Aeromonas jandaei)等l4個氣單胞菌表型種和16個基因種,其模式種為嗜水氣單胞菌,豚鼠氣單胞菌是極常見的氣單胞菌。 氣單胞菌屬細菌在臨床和環境中都分布很廣,水、土壤、空氣中都有分布。
由氣單胞菌屬細菌引起的水產養殖動物疾病種類繁多,不僅給水產養殖業帶來嚴重的經濟損失,還可通過水產動物和水產品感染人畜,導致人畜腹瀉和食物中毒,影響人類健康。氣單胞菌屬可以引起人類的腸外感染和腸內感染,前者包括敗血癥、創傷、膽囊炎,眼、關節、肺部、腹腔內及全身性的感染等,患者常有免疫功能低下;后者主要表現為腸胃炎。臨床常見的氣單胞菌屬包括嗜水氣單胞菌、豚鼠氣單胞菌和維氏氣單胞菌溫和亞種(也被命名為溫和氣單胞菌)。
五、檢測方法
在我國,目前僅制定了嗜水氣單胞菌的檢測方法(GB/T18652-2002),而對氣單胞菌屬的標準檢測鑒定方法尚未建立。部分地區制定了方法不一的氣單胞菌初篩技術方法,但是存在對某些生化不典型菌株(如乳糖陽性或甘露醇陰性等)的錯誤鑒定。國外專業實驗室通過基因測序的方法鑒定氣單胞菌,但該技術需依賴分子診斷實驗室的儀器配置,這對大多數國內基層實驗室來說存在軟件或硬件不足。
基于目前食品安全和國內持續上升的食源性疾病防控形勢,眾多相關領域的實驗室,包括臨床、公共衛生、質檢、出入境和動物獸醫等實驗室對各領域的篩檢樣品中可疑氣單胞菌需要有更加專業的認識和鑒別能力,以及更加簡便、精確的鑒定方法,才能避免錯誤的鑒定,從而在多源頭有效的控制氣單胞菌疫情的傳播和擴散。有研究開發了一種氣單胞菌屬細菌的檢測方法,包括如下步驟:
a,提取樣本DNA:提取待檢樣本中的DNA; b,基因擴增:用權利要求1所述的試劑盒對待檢樣本中的DNA進行擴增; c,結果檢測:對DNA擴增結果進行檢測。
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