蛋白翻譯后修飾 (PTM) 是指蛋白質(zhì)合成后發(fā)生的化學(xué)修飾，這些修飾可以改變蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、功能和定位，在細(xì)胞信號傳導(dǎo)、代謝和疾病發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。瑞典Navinci公司研發(fā)的臨近鏈接技術(shù)（Proximity Ligation Assay, PLA）為研究PTMs提供了一種高靈敏度和高特異性的方法。

蛋白翻譯后修飾 (PTMs)

蛋白質(zhì)是細(xì)胞功能的主要執(zhí)行者，而蛋白翻譯后修飾通過在蛋白質(zhì)上添加或移除特定化學(xué)基團(tuán)，精細(xì)地調(diào)控蛋白質(zhì)的活性、定位、穩(wěn)定性及與其他分子的相互作用。常見的 PTM 包括：

• 磷酸化：磷酸基團(tuán)的添加，通常由蛋白激酶催化，可以改變蛋白質(zhì)的活性、定位和與其他蛋白質(zhì)的相互作用。

• 糖基化：糖基的添加，可以影響蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性、溶解度和與其他蛋白質(zhì)的相互作用。

• 泛素化：泛素蛋白的添加，可以標(biāo)記蛋白質(zhì)進(jìn)行降解。

• 乙酰化：乙酰基的添加，可以影響蛋白質(zhì)的活性、穩(wěn)定性和與其他蛋白質(zhì)的相互作用。

PTMs在細(xì)胞信號傳導(dǎo)、代謝、細(xì)胞周期調(diào)控、免疫反應(yīng)和疾病發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。例如，磷酸化可以調(diào)節(jié)酶的活性，糖基化可以影響蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性和定位，泛素化可以標(biāo)記蛋白質(zhì)進(jìn)行降解。PTMs 異常與疾病相關(guān)，以癌癥為例，一些癌基因的過度磷酸化會導(dǎo)致細(xì)胞生長失控，而一些抑癌基因的過度泛素化會導(dǎo)致其降解，從而促進(jìn)腫瘤生長。

Schematic PTM discovery timeline for 10 major PTMs

臨近連接技術(shù) (PLA)

PLA技術(shù)由瑞典NAvinci技術(shù)公司開發(fā)，其核心原理基于臨近效應(yīng)引發(fā)的信號放大（S?derberg, O. et al. (2006). Direct observation of individual endogenous protein complexes in situ by proximity ligation. Nature Methods, 3(12), 995 - 1000.）。

PLA 實驗流程：該技術(shù)使用兩對抗體，每對抗體分別連接一段寡核苷酸序列。當(dāng)這兩對抗體特異性地結(jié)合到目標(biāo)蛋白復(fù)合物上彼此靠近（通常距離在40nm內(nèi)）時，連接在抗體上的寡核苷酸序列也隨之靠近。此時，通過DNA連接酶將相鄰的寡核苷酸連接起來，形成一個完整的可擴(kuò)增的DNA環(huán)。隨后，利用滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)（rolling circle amplification, RCA）對這個DNA環(huán)進(jìn)行大量擴(kuò)增，產(chǎn)生一條長鏈的單鏈DNA，其上包含多個重復(fù)的序列單元。最后，通過熒光標(biāo)記的互補(bǔ)寡核苷酸探針與擴(kuò)增后的DNA鏈雜交，借助熒光顯微鏡或其他熒光檢測設(shè)備即可檢測到熒光信號，熒光信號的強(qiáng)度與目標(biāo)蛋白復(fù)合物的數(shù)量成正比，從而實現(xiàn)對目標(biāo)蛋白復(fù)合物的定性和定量檢測

PLA 技術(shù)檢測PTMs 應(yīng)用案例

• 磷酸化HER2 檢測

采用Naveni pY HER2試劑盒檢測，Detection fluorophore TEX615

• 磷酸化EGFR 檢測

采用Naveni pY EGFR試劑盒檢測，Detection fluorophore TEX615

同時也可以選擇斯達(dá)特各類修飾抗體搭配NaveniFlex 試劑盒實現(xiàn)多種磷酸化蛋白檢測