在微觀的細胞王國里,沒有電話,沒有微信,細胞們?nèi)绾尉珳收{(diào)控自己的命運——何時分裂增殖?何時分化成熟?何時遷移修復?何時功成身退?答案就藏在那些被稱為“生長因子”的蛋白質小分子中!它們?nèi)缤毎g的摩斯密碼,傳遞著至關重要的生命指令。今天,我們聚焦兩位“明星信使”:EGF(表皮生長因子)和TGF(轉化生長因子),揭秘它們的功能奧秘與實驗應用技巧!
一、明星登場:認識EGF與TGF家族
1. EGF (Epidermal Growth Factor) 表皮生長因子
? 身份: 最早被發(fā)現(xiàn)、研究zui廣泛的生長因子之一,屬于EGF家族(包含HB-EGF, TGF-α等)。
? 核心使命: 強力促進細胞增殖!
靶細胞: 廣泛作用于上皮細胞、成纖維細胞、角質形成細胞、多種干細胞等。
關鍵作用:
刺激細胞分裂與增殖: 加速傷口愈合、組織修復。
促進細胞遷移: 在胚胎發(fā)育、傷口愈合中起關鍵作用。
抑制細胞凋亡: 維持細胞存活。
參與發(fā)育分化: 影響特定組織器官的形成。
? 信號通路: 結合細胞膜上的EGFR(表皮生長因子受體) → 觸發(fā)受體二聚化及自磷酸化 → 激活下游RAS-RAF-MEK-ERK (MAPK通路) 和 PI3K-AKT-mTOR通路 → 促進細胞周期進程(G1到S期)及生存。
2. TGF (Transforming Growth Factor) 轉化生長因子
? 身份: 一個龐大的超家族,成員眾多,功能復雜多樣,甚至相反!最核心、研究最深入的是 TGF-β亞家族 (包括TGF-β1, β2, β3, Activins, Nodal, BMPs等)。
? 核心使命: 高度環(huán)境依賴,功能“雙面刃”!
靶細胞: 幾乎影響所有細胞類型。
關鍵作用 (以TGF-β1為代表):
抑制增殖: 對大多數(shù)上皮細胞和免疫細胞是強效的生長抑制劑(使細胞停滯在G1期)。
促進分化: 誘導間充質干細胞向成骨細胞、軟骨細胞分化;參與上皮間質轉化(EMT),這在胚胎發(fā)育、傷口愈合(早期)、但也與腫瘤轉移相關。
刺激細胞外基質合成: 促進膠原等ECM蛋白產(chǎn)生,對組織纖維化至關重要(過度則導致病理性纖維化)。
免疫調(diào)節(jié): 主要發(fā)揮免疫抑制作用,調(diào)節(jié)T細胞分化,維持免疫耐受。
促進凋亡: 在某些情況下誘導特定細胞死亡。
? 信號通路: 結合細胞膜上的II型受體 → 招募并磷酸化I型受體 → 激活受體調(diào)節(jié)的Smad蛋白 (R-Smads:Smad2/3 for TGF-β/Activin/Nodal, Smad1/5/8 for BMPs) → R-Smads與Co-Smad (Smad4) 形成復合物入核 → 調(diào)控靶基因轉錄。非Smad通路(如MAPK, PI3K)也參與其復雜調(diào)控。
二、實驗室應用:如何正確使用這些“魔法因子”?
關鍵操作要點:步步為營
1. 儲存與復溶:
嚴格按說明書操作! 通常是凍干粉或高濃度溶液保存在-20°C或-80°C。
復溶時使用無菌、無內(nèi)毒素的溶劑(通常是含載體蛋白如BSA的緩沖液或培養(yǎng)用基礎液)。避免反復凍融!
復溶后根據(jù)使用頻率分裝,儲存于-20°C或-80°C。工作液可在4°C短期存放(1-2周,依說明書)。
2. 工作濃度:黃金法則!
濃度范圍差異巨大! 切忌經(jīng)驗主義!
必查文獻! 參考你所研究特定細胞類型的相關文獻中使用的濃度。
必看說明書! 商品化因子會提供建議濃度范圍。
典型參考范圍 (需驗證!):
EGF: 常用 1 - 100 ng/mL (如原代角質形成細胞培養(yǎng)常加10-20 ng/mL)。
TGF-β1: 常用 0.1 - 20 ng/mL。濃度過低可能無效,過高可能誘導非預期效應(如強EMT或過度纖維化)。1-5 ng/mL 常用于抑制增殖或誘導輕度EMT。
進行濃度梯度預實驗: 對于新細胞或關鍵實驗,務必設置不同濃度梯度(如0, 0.1, 1, 5, 10, 20 ng/mL),找到蕞優(yōu)效果且無細胞毒性的濃度。
3. 添加方式:
直接加入培養(yǎng)基: 最常見方式。在無菌操作下,將計算好體積的生長因子溶液輕柔加入wan全培養(yǎng)基中,充分混勻。
更換含因子培養(yǎng)基: 在需要精確控制作用時間或去除舊因子影響時(如誘導分化),吸掉舊培養(yǎng)基,加入新配制的含因子培養(yǎng)基。
4. 作用時間:
EGF: 促進增殖通常需要持續(xù)暴露(每次換液都需添加)。
TGF-β: 其效應可能是時間依賴性的:
短期處理(幾小時到幾天):可能快速激活信號(如磷酸化Smad2/3),誘導部分基因表達。
長期處理(數(shù)天到數(shù)周):才能觀察到明顯的表型變化(如生長抑制、EMT、基質沉積、分化標志物表達)。需根據(jù)實驗目的設計處理時長。
逐典生物推出多種細胞培養(yǎng)關鍵生長因子因子,具備高生物活性,高純度和高結構均一性,質控嚴格,確保強特異性、高靈敏度、高穩(wěn)定性及良好的重復性,全面助力MSC相關藥物研發(fā)及上市。
1. bFGF(CY024F0010)
重組人 bFGF 利用小鼠 Balb/c 3T3 細胞刺激細胞增殖, ED50≤0.05 ng/mL,對應的比活性≥1.0 × 107 units/mg
2. EGF(CY069F0010)
重組人 EGF 通過小鼠 Balb/c 3T3 細胞刺激細胞增殖,ED50≤0.1 ng/mL,對應的比活性≥1.0×107 Units/mg
訂購信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格(μg) | 產(chǎn)品貨號 |
EGF | 10 μg | CY069F0010 |
20 μg | CY069F0020 | |
50 μg | CY069F0050 | |
50 μg | CYG069F0050 | |
500 μg | CYG069F0500 | |
bFGF | 10 μg | CY024F0010 |
20 μg | CY024F0020 | |
50 μg | CY024F0050 | |
50 μg | CYG024F0050 | |
500 μg | CYG024F0500 | |
PDGF-AA | 10 μg | CY056F0010 |
20 μg | CY056F0020 | |
50 μg | CY056F0050 | |
PDGF-BB | 10 μg | CY035F0010 |
20 μg | CY035F0020 | |
50 μg | CY035F0050 |
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