細(xì)胞通訊的摩斯密碼:EGF & TGF生長因子使用指南,解鎖實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵開關(guān)!
在微觀的細(xì)胞王國里,沒有電話,沒有微信,細(xì)胞們?nèi)绾尉珳?zhǔn)調(diào)控自己的命運(yùn)——何時(shí)分裂增殖?何時(shí)分化成熟?何時(shí)遷移修復(fù)?何時(shí)功成身退?答案就藏在那些被稱為“生長因子”的蛋白質(zhì)小分子中!它們?nèi)缤?xì)胞間的摩斯密碼,傳遞著至關(guān)重要的生命指令。今天,我們聚焦兩位“明星信使”:EGF(表皮生長因子)和TGF(轉(zhuǎn)化生長因子),揭秘它們的功能奧秘與實(shí)驗(yàn)應(yīng)用技巧!
一、明星登場:認(rèn)識EGF與TGF家族
1. EGF (Epidermal Growth Factor) 表皮生長因子
? 身份: 最早被發(fā)現(xiàn)、研究zui廣泛的生長因子之一,屬于EGF家族(包含HB-EGF, TGF-α等)。
? 核心使命: 強(qiáng)力促進(jìn)細(xì)胞增殖!
靶細(xì)胞: 廣泛作用于上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞、多種干細(xì)胞等。
關(guān)鍵作用:
刺激細(xì)胞分裂與增殖: 加速傷口愈合、組織修復(fù)。
促進(jìn)細(xì)胞遷移: 在胚胎發(fā)育、傷口愈合中起關(guān)鍵作用。
抑制細(xì)胞凋亡: 維持細(xì)胞存活。
參與發(fā)育分化: 影響特定組織器官的形成。
? 信號通路: 結(jié)合細(xì)胞膜上的EGFR(表皮生長因子受體) → 觸發(fā)受體二聚化及自磷酸化 → 激活下游RAS-RAF-MEK-ERK (MAPK通路) 和 PI3K-AKT-mTOR通路 → 促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)程(G1到S期)及生存。
2. TGF (Transforming Growth Factor) 轉(zhuǎn)化生長因子
? 身份: 一個(gè)龐大的超家族,成員眾多,功能復(fù)雜多樣,甚至相反!最核心、研究最深入的是 TGF-β亞家族 (包括TGF-β1, β2, β3, Activins, Nodal, BMPs等)。
? 核心使命: 高度環(huán)境依賴,功能“雙面刃”!
靶細(xì)胞: 幾乎影響所有細(xì)胞類型。
關(guān)鍵作用 (以TGF-β1為代表):
抑制增殖: 對大多數(shù)上皮細(xì)胞和免疫細(xì)胞是強(qiáng)效的生長抑制劑(使細(xì)胞停滯在G1期)。
促進(jìn)分化: 誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞分化;參與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT),這在胚胎發(fā)育、傷口愈合(早期)、但也與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)。
刺激細(xì)胞外基質(zhì)合成: 促進(jìn)膠原等ECM蛋白產(chǎn)生,對組織纖維化至關(guān)重要(過度則導(dǎo)致病理性纖維化)。
免疫調(diào)節(jié): 主要發(fā)揮免疫抑制作用,調(diào)節(jié)T細(xì)胞分化,維持免疫耐受。
促進(jìn)凋亡: 在某些情況下誘導(dǎo)特定細(xì)胞死亡。
? 信號通路: 結(jié)合細(xì)胞膜上的II型受體 → 招募并磷酸化I型受體 → 激活受體調(diào)節(jié)的Smad蛋白 (R-Smads:Smad2/3 for TGF-β/Activin/Nodal, Smad1/5/8 for BMPs) → R-Smads與Co-Smad (Smad4) 形成復(fù)合物入核 → 調(diào)控靶基因轉(zhuǎn)錄。非Smad通路(如MAPK, PI3K)也參與其復(fù)雜調(diào)控。
二、實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用:如何正確使用這些“魔法因子”?
關(guān)鍵操作要點(diǎn):步步為營
1. 儲(chǔ)存與復(fù)溶:
嚴(yán)格按說明書操作! 通常是凍干粉或高濃度溶液保存在-20°C或-80°C。
復(fù)溶時(shí)使用無菌、無內(nèi)毒素的溶劑(通常是含載體蛋白如BSA的緩沖液或培養(yǎng)用基礎(chǔ)液)。避免反復(fù)凍融!
復(fù)溶后根據(jù)使用頻率分裝,儲(chǔ)存于-20°C或-80°C。工作液可在4°C短期存放(1-2周,依說明書)。
2. 工作濃度:黃金法則!
濃度范圍差異巨大! 切忌經(jīng)驗(yàn)主義!
必查文獻(xiàn)! 參考你所研究特定細(xì)胞類型的相關(guān)文獻(xiàn)中使用的濃度。
必看說明書! 商品化因子會(huì)提供建議濃度范圍。
典型參考范圍 (需驗(yàn)證!):
EGF: 常用 1 - 100 ng/mL (如原代角質(zhì)形成細(xì)胞培養(yǎng)常加10-20 ng/mL)。
TGF-β1: 常用 0.1 - 20 ng/mL。濃度過低可能無效,過高可能誘導(dǎo)非預(yù)期效應(yīng)(如強(qiáng)EMT或過度纖維化)。1-5 ng/mL 常用于抑制增殖或誘導(dǎo)輕度EMT。
進(jìn)行濃度梯度預(yù)實(shí)驗(yàn): 對于新細(xì)胞或關(guān)鍵實(shí)驗(yàn),務(wù)必設(shè)置不同濃度梯度(如0, 0.1, 1, 5, 10, 20 ng/mL),找到蕞優(yōu)效果且無細(xì)胞毒性的濃度。
3. 添加方式:
直接加入培養(yǎng)基: 最常見方式。在無菌操作下,將計(jì)算好體積的生長因子溶液輕柔加入wan全培養(yǎng)基中,充分混勻。
更換含因子培養(yǎng)基: 在需要精確控制作用時(shí)間或去除舊因子影響時(shí)(如誘導(dǎo)分化),吸掉舊培養(yǎng)基,加入新配制的含因子培養(yǎng)基。
4. 作用時(shí)間:
EGF: 促進(jìn)增殖通常需要持續(xù)暴露(每次換液都需添加)。
TGF-β: 其效應(yīng)可能是時(shí)間依賴性的:
短期處理(幾小時(shí)到幾天):可能快速激活信號(如磷酸化Smad2/3),誘導(dǎo)部分基因表達(dá)。
長期處理(數(shù)天到數(shù)周):才能觀察到明顯的表型變化(如生長抑制、EMT、基質(zhì)沉積、分化標(biāo)志物表達(dá))。需根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑O(shè)計(jì)處理時(shí)長。
逐典生物推出多種細(xì)胞培養(yǎng)關(guān)鍵生長因子因子,具備高生物活性,高純度和高結(jié)構(gòu)均一性,質(zhì)控嚴(yán)格,確保強(qiáng)特異性、高靈敏度、高穩(wěn)定性及良好的重復(fù)性,全面助力MSC相關(guān)藥物研發(fā)及上市。
1. bFGF(CY024F0010)
重組人 bFGF 利用小鼠 Balb/c 3T3 細(xì)胞刺激細(xì)胞增殖, ED50≤0.05 ng/mL,對應(yīng)的比活性≥1.0 × 107 units/mg
2. EGF(CY069F0010)
重組人 EGF 通過小鼠 Balb/c 3T3 細(xì)胞刺激細(xì)胞增殖,ED50≤0.1 ng/mL,對應(yīng)的比活性≥1.0×107 Units/mg
訂購信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格(μg) | 產(chǎn)品貨號 |
EGF | 10 μg | CY069F0010 |
20 μg | CY069F0020 | |
50 μg | CY069F0050 | |
50 μg | CYG069F0050 | |
500 μg | CYG069F0500 | |
bFGF | 10 μg | CY024F0010 |
20 μg | CY024F0020 | |
50 μg | CY024F0050 | |
50 μg | CYG024F0050 | |
500 μg | CYG024F0500 | |
PDGF-AA | 10 μg | CY056F0010 |
20 μg | CY056F0020 | |
50 μg | CY056F0050 | |
PDGF-BB | 10 μg | CY035F0010 |
20 μg | CY035F0020 | |
50 μg | CY035F0050 |
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