潔凈區(qū)作為制藥、食品、生物科技等行業(yè)生產(chǎn)的核心區(qū)域，其環(huán)境控制直接關系到產(chǎn)品質量與安全性。溫濕度作為潔凈區(qū)環(huán)境控制的關鍵參數(shù)，一旦失衡將引發(fā)微生物（尤其是霉菌）的異常增殖，進而導致產(chǎn)品污染、批次報廢甚至引發(fā)質量事故。本文圍繞“溫濕度控制失衡→霉菌污染→系統(tǒng)性處理”的邏輯鏈條，重點探討霉菌污染的滅菌技術優(yōu)化與企業(yè)級維護體系的構建，為潔凈區(qū)環(huán)境管理提供實踐參考。

潔凈區(qū)溫濕度控制的核心要求

根據(jù)《藥品生產(chǎn)質量管理規(guī)范（GMP）》及ISO 14644-1標準，潔凈區(qū)（如A/B級無菌區(qū)）的溫濕度需嚴格控制在特定范圍：溫度通常為20-24℃，相對濕度（RH）為45%-65%。這一范圍既保障人員操作舒適性，又抑制微生物（尤其是霉菌）的繁殖——霉菌孢子在RH＞60%、溫度15-30℃時萌發(fā)率顯著升高，而RH＜40%時孢子活性被抑制。

溫濕度失衡的典型誘因

    實踐中，溫濕度失衡多由以下因素疊加導致：

· 設備端：空調凈化系統(tǒng)（HVAC）的溫濕度傳感器校準偏差、表冷器結垢導致除濕效率下降、新風/回風比例失調；

· 操作端：人員頻繁進出導致門體開啟時間過長（每開啟1分鐘，潔凈區(qū)RH可能上升2%-3%）、物料傳遞時未充分預溫/預濕；

· 環(huán)境端：季節(jié)性氣候波動（如梅雨季RH驟升至80%以上）、生產(chǎn)工藝放熱（如發(fā)酵罐運行導致局部溫度升高5-8℃）。

霉菌污染的危害與特征

霉菌（如青霉、曲霉、毛霉）在潔凈區(qū)的污染具有隱蔽性與擴散性：

· 直接危害：孢子或代謝產(chǎn)物（如黃曲霉毒素）可能混入產(chǎn)品，導致微生物限度超標或內毒素污染；

· 間接危害：霉菌在墻面、設備縫隙等“衛(wèi)生死角”形成生物膜，常規(guī)清潔難以清除（可以采取），成為持續(xù)污染源；

· 檢測難點：傳統(tǒng)浮游菌采樣對霉菌的捕獲率僅為50%-70%，需結合沉降菌法（4小時沉降碟）與表面擦拭法（接觸碟）綜合判定。

    適用場景：單臺設備表面、傳遞窗內壁等小范圍（＜1㎡）霉菌可見菌斑。

技術選擇：

· 化學擦拭：采用高效消毒劑—奧克泰士消毒劑（具備高度材料兼容性，適合多種場景）擦拭，作用時間≥10分鐘；

· 干熱滅菌：對耐高溫金屬部件（如不銹鋼支架），使用便攜式干熱槍（300℃）灼燒30秒，破壞孢子結構；

· 臭氧熏蒸（局部）：對密閉空間（如物料緩沖間），通入濃度10-20ppm的臭氧，作用2小時（需注意臭氧對橡膠密封件的老化影響）。

關鍵注意點：處置后需用ATP生物熒光檢測儀（靈敏度≥0.1pg ATP）驗證清潔效果，確保生物負載降至＜100CFU/表面。

適用場景：墻面、地面或多臺設備表面出現(xiàn)散在菌斑（污染面積1-5㎡），浮游菌檢測顯示霉菌占比＞30%。

技術組合：

· 冷干霧奧克泰士滅菌：通過干霧機器將奧克泰士消毒劑霧化為標準顆粒，在潔凈區(qū)形成包容氣體環(huán)境，作用規(guī)定時效。奧克泰士消毒劑對霉菌孢子的殺滅對數(shù)（LRV）可達6（即殺滅率99.9999%），且分解產(chǎn)物為水和氧氣，無殘留；

· 紫外線（UV-C）輔助：在冷干霧滅菌后，開啟波長254nm的紫外線燈（輻照強度≥150μW/cm2），對天花板、回風口等高位區(qū)域補照2小時，破壞未被覆蓋的孢子DNA；

· 濕熱滅菌（HVAC系統(tǒng)）：針對空調箱表冷器、風管內的霉菌生物膜，將HVAC系統(tǒng)運行模式切換為“高溫高濕”（溫度80℃、RH 90%），持續(xù)1小時，利用蒸汽穿透生物膜結構。

效果驗證：需在滅菌后48小時內進行3次連續(xù)采樣（浮游菌、沉降菌、表面菌），確保霉菌檢出率＜5%（以總微生物計數(shù)為基準）。

    適用場景：連續(xù)3次檢測顯示霉菌污染呈上升趨勢（如周均檢出量增長50%以上），或在關鍵工序區(qū)（如灌封間）發(fā)現(xiàn)霉菌。

技術策略：

· 全系統(tǒng)排查：通過氣流流向測試（煙霧法）定位“死區(qū)”（如墻角、設備背面），結合微生物圖譜分析（如PCR基因測序）確定污染菌種（如黑曲霉為典型環(huán)境源，白色念珠菌可能來自人員）；

· 深度清潔+滅菌：

o 拆除可移動設備（如傳遞窗），使用高壓水槍（壓力≥100bar）配合中性清潔劑沖洗，去除生物膜基質；

o 對不可移動設備（如凍干機），采用“泡沫清潔劑（含EDTA絡合劑）→酶清潔劑（含蛋白酶）→VHP滅菌”的三步法，溶解生物膜中的蛋白質與多糖；

· 工藝參數(shù)修正：

    若污染與溫濕度控制邏輯相關（如PID控制器參數(shù)偏差），需重新校準傳感器（精度需達±0.5℃/±2%RH，結合內部SOP制定落實），并調整HVAC的“溫濕度耦合控制”策略（如當溫度升高時，同步降低設定RH以抑制霉菌）。

· 一級監(jiān)控（實時）：在潔凈區(qū)關鍵點位（如灌封崗位、無菌轉運通道）部署在線溫濕度傳感器（精度±0.3℃/±1%RH），數(shù)據(jù)實時上傳至EMS系統(tǒng)，設置預警閾值（如溫度＞24℃或RH＞65%觸發(fā)聲光報警）；

· 二級監(jiān)控（周期性）：每周進行一次“溫濕度均勻性測試”（使用移動巡檢儀在9個測試點采樣），每月分析HVAC系統(tǒng)的“溫濕度波動曲線”（重點關注生產(chǎn)時段與非生產(chǎn)時段的差異）；

· 三級監(jiān)控（趨勢分析）：每季度將溫濕度數(shù)據(jù)與微生物檢測數(shù)據(jù)（如霉菌檢出量）進行相關性分析，識別潛在風險因子（如“當RH連續(xù)3天＞60%時，3天后霉菌檢出量增加2倍”）。

· 培訓內容定制化：針對操作人員（如HVAC運維員），重點培訓傳感器校準、表冷器清洗（每季度1次）、風閥調節(jié)等實操技能；針對生產(chǎn)人員，強化“快速出入潔凈區(qū)”（單次開門時間≤30秒）、“物料預溫/預濕”（如物料需在緩沖間放置2小時平衡溫濕度）等規(guī)范；

· 考核機制嚴格化：每半年進行一次“模擬污染場景演練”（如模擬HVAC故障導致RH升至70%），要求團隊在30分鐘內完成“故障診斷→臨時控制（如開啟除濕機）→上報→后續(xù)處置”的全流程，未滿足需重新培訓。