一、色譜柱再生:恢復分離效能的關鍵步驟
凝膠色譜柱長期使用后,可能因樣品殘留或微生物污染導致柱效下降。再生流程需根據污染物類型選擇方法:
有機物污染:用純甲醇或乙腈以0.5mL/min流速沖洗2-4小時,置換凝膠孔隙中的疏水雜質。
鹽沉積或蛋白質污染:采用階梯式沖洗法,先用50%乙腈+0.1%TFA)沖洗1小時,再換用0.1MNaOH溶液沖洗2小時(需確認色譜柱耐受pH),最后用純水平衡至中性。
再生后驗證:注射標準樣品(如聚乙二醇或藍葡聚糖),對比再生前后保留時間與峰形,若理論塔板數恢復至初始值的80%以上,則再生成功。
二、泵密封更換:保障流速穩定的核心操作
泵密封磨損會導致漏液或壓力波動,需定期更換:
更換時機:若發現泵頭有液體滲出、壓力不穩定或流速誤差超過±2%,需立即更換密封圈。
操作步驟:關閉儀器電源,排空系統壓力;拆卸泵頭,取出舊密封圈(注意方向);用異丙醇清潔密封槽,安裝新密封圈并涂抹硅脂潤滑;重新組裝后,用純水以0.1mL/min流速排氣泡,逐步升至目標流速。
注意事項:避免使用尖銳工具觸碰密封圈,防止劃傷;更換后需運行至少30分鐘,觀察壓力是否穩定。
三、基線校準:確保數據準確性的基礎
基線漂移或噪聲過高會影響定量結果,需定期校準:
校準前準備:用純流動相沖洗系統至基線穩定(通常需2-4小時),確保檢測器池溫度與柱溫一致。
校準方法:進入儀器軟件“基線校準”模塊,采集空白溶劑信號,自動扣除背景噪聲;若手動校準,需記錄基線偏移值,在數據分析時修正。
維護建議:每月檢查一次基線穩定性,若噪聲>0.5mAU(UV檢測器)或漂移>0.1mAU/min,需清洗檢測器流通池或更換氘燈。
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