基于質(zhì)粒的電穿孔在永生化 T 淋巴細(xì)胞中進(jìn)行高效基因工程
突出
第一次全面表征永生化 T 細(xì)胞系 CTLL-2 和 HT-2。
質(zhì)粒電穿孔可實(shí)現(xiàn)高效且具有成本效益的 T 細(xì)胞工程。
用于 T 細(xì)胞電穿孔的優(yōu)化轉(zhuǎn)基因啟動(dòng)子和質(zhì)粒結(jié)構(gòu)。
多功能轉(zhuǎn)基因遞送策略簡(jiǎn)化了 T 細(xì)胞工程工作流程。
用于精確 T 細(xì)胞工程的高效 CRISPR/Cas9 基因組編輯工具包。
摘要
轉(zhuǎn)基因 T 細(xì)胞療法最近的臨床成功凸顯了加速 T 淋巴細(xì)胞基礎(chǔ)研究和功能篩選方法的迫切需要。然而,一種簡(jiǎn)單且具有成本效益的 T 細(xì)胞高效基因工程方法仍然難以捉摸。目前的方法通常依賴于病毒轉(zhuǎn)導(dǎo),這是勞動(dòng)密集型的,需要嚴(yán)格的生物安全措施。基于質(zhì)粒的電穿孔提供了一種經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的替代方案,但在 T 細(xì)胞中仍未得到充分探索。此外,原型 T 細(xì)胞系的可用性是有限的。在這里,我們通過(guò)關(guān)注兩種永生化小鼠 T 細(xì)胞系 HT-2 和 CTLL-2 來(lái)應(yīng)對(duì)這些挑戰(zhàn),它們概括了原代 T 細(xì)胞的關(guān)鍵特征,包括細(xì)胞毒性和細(xì)胞因子依賴性增殖。除了廣泛使用的 Jurkat T 細(xì)胞系外,HT-2 和 CTLL-2 還通過(guò)在基于比色皿的系統(tǒng)中通過(guò)優(yōu)化的電穿孔成功高效地轉(zhuǎn)染了單個(gè)或多個(gè)基因。值得注意的是,質(zhì)粒構(gòu)建體的優(yōu)化能夠遞送高達(dá) 6.5 kb 對(duì)的目標(biāo)基因 (GOI) 大貨物,以及通過(guò)睡美人轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)將 GOI 穩(wěn)定整合到基因組中。我們還開(kāi)發(fā)了在永生化 T 淋巴細(xì)胞中進(jìn)行 CRISPR/Cas9 介導(dǎo)的基因編輯的先進(jìn)方法,實(shí)現(xiàn)了高達(dá) 97% 的敲除效率和高達(dá) 70% 的基于同源定向修復(fù) (HDR) 的靶向敲入效率。我們相信這種基于質(zhì)粒的優(yōu)化電穿孔方法將有助于淋巴細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ)研究的進(jìn)步,并為 T 細(xì)胞療法的臨床前研究提供實(shí)用、經(jīng)濟(jì)高效的工具。
原標(biāo)題:Plasmid-based electroporation for efficient genetic engineering in immortalized T lymphocytes 通訊作者:Martin Fussenegger
了解更多國(guó)產(chǎn)電轉(zhuǎn)儀就選合肥中科國(guó)騰!
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來(lái)源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來(lái)源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來(lái)源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來(lái)源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問(wèn)題,請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。