活細胞相差、熒光顯微時間序列動態觀察采集是細胞生物學研究中的重要技術手段，可實時觀察活細胞的動態變化，以下是具體介紹：

原理：相差顯微鏡是利用光線通過透明標本時產生的光程差（即相位差）轉化為振幅差（即亮度差），使無色透明的細胞結構變得清晰可見，無需染色就能觀察活細胞形態。熒光顯微鏡則是通過特定波長的激發光照射熒光標記的細胞，使熒光物質發出熒光，從而觀察細胞內特定結構或分子的分布與動態變化。時間序列動態觀察采集是在不同時間點連續拍攝，記錄細胞隨時間的變化過程。

設備要求：

顯微鏡：可選擇具備相差和熒光功能的倒置顯微鏡，如尼康 Ti2-E 全自動活細胞顯微成像系統，其具有大視野、高速成像、高分辨率等特點，可進行明場 / 熒光圖像采集和時間序列成像。也可選擇激光共聚焦顯微鏡，如蔡司 LSM 800，能實現高分辨率的熒光成像，還可進行光切片采集和三維重建，適合觀察細胞內部結構的動態變化。

相機：需配備高靈敏度相機，如 CMOS 或 sCMOS 相機。sCMOS 相機量子效率高，可在低光照條件下獲得清晰圖像，減少光毒性對活細胞的影響，還能實現高速成像，滿足時間序列采集需求。

環境控制裝置：活細胞長時間觀察需要穩定的培養環境，因此顯微鏡需配備溫控培養系統、CO?培養箱等，以維持細胞生存所需的溫度、濕度和氣體環境。

操作流程：

樣品準備：將待觀察的活細胞接種于合適的培養器皿中，如培養皿、多孔板等。若進行熒光觀察，需根據研究目的用相應的熒光染料對細胞進行標記，標記方法可根據染料說明書進行操作，標記后將細胞置于培養箱中培養一段時間，使細胞狀態穩定。

顯微鏡設置：將培養器皿放置在顯微鏡載物臺上，開啟顯微鏡及相關附件，如光源、相機、環境控制裝置等。選擇相差模式，調節焦距和光圈等參數，使細胞圖像清晰可見。若進行熒光觀察，根據熒光染料的激發和發射波長，選擇合適的熒光通道和濾光片組合。

時間序列參數設置：設置采集時間間隔和總采集時間，時間間隔可根據細胞變化速度確定，如細胞分裂速度較慢，可設置幾分鐘甚至幾十分鐘采集一次；對于快速變化的過程，如鈣離子信號傳導，可能需要每秒甚至更高頻率采集?？偛杉瘯r間根據實驗目的而定，可從數小時到數天不等。同時，開啟自動對焦功能，確保在長時間采集過程中細胞始終處于焦平面上。

圖像采集：設置好參數后，啟動時間序列采集程序，相機將按照設定的時間間隔自動拍攝圖像，記錄細胞的動態變化過程。采集過程中，可實時查看圖像，確保采集正常進行。

數據處理與分析：采集完成后，可使用顯微鏡配套的圖像分析軟件，對時間序列圖像進行處理和分析，如自動識別細胞、追蹤細胞運動軌跡、量化熒光強度變化、分析細胞增殖或凋亡率等，還可將圖像制作成動態視頻，直觀展示細胞的變化過程。